Proteinuria patologică este unul dintre cele mai importante și permanente semne de boli ale tractului urinar și rinichilor. Determinarea concentrației de proteine ​​din urină este un element esențial și important al testării urinei. Identificarea și evaluarea cantitativă a proteinuriei este importantă nu numai în diagnosticarea multor boli renale primare și secundare, evaluarea modificărilor în severitatea proteinuriei în dinamică transmite informații despre cursul procesului patologic, despre eficacitatea tratamentului. Detectarea proteinelor în urină, chiar și în cantități mici, ar trebui să fie alarmantă pentru posibilele boli ale rinichilor sau ale tractului urinar și necesită reanaliză. O atenție deosebită este lipsa de sensibilitate a testelor de urină și, în special, determinarea proteinei urinare fără respectarea tuturor regulilor de colectare a acesteia.

Toate metodele de determinare a proteinei în urină pot fi împărțite în:

• calitate,
• semicantitativă,
• Cantitativă.

Metode calitative

Toate probele de proteine ​​de urină de înaltă calitate se bazează pe capacitatea proteinelor de a denatura sub influența factorilor fizici și chimici diferiți. În prezența proteinei din proba de urină, există fie turbiditate, fie pierderea sedimentului floculant.

Condiții pentru determinarea proteinei în urină pe baza reacției de coagulare:

1. Urina ar trebui să fie acidă. Urina alcalină este acidificată cu mai multe (2-3) picături de acid acetic (5-10%).
2. Urina trebuie să fie clară. Turbiditatea este eliminată printr-un filtru de hârtie. Dacă turbiditatea nu dispare, se adaugă talc sau magneziu ars (aproximativ 1 linguriță per 100 ml de urină), se agită și se filtrează.
3. Testul calitativ ar trebui efectuat în două tuburi, unul dintre ele - controlul.
4. Căutarea turbidității ar trebui să aibă un fundal negru în lumina transmisă.

Metodele calitative pentru determinarea proteinelor în urină includ:

După cum se arată în numeroase studii, niciunul din numărul mare de metode cunoscute pentru determinarea calitativă a proteinelor în urină nu permite obținerea unor rezultate fiabile și reproductibile. În ciuda acestui fapt, în majoritatea CDL din Rusia, aceste metode sunt utilizate pe scară largă ca screening - în urină cu un răspuns calitativ pozitiv, se efectuează cuantificarea proteinei. Din reacțiile calitative, se utilizează mai frecvent un test Geller și o probă cu acid sulfosalicilic, însă o probă cu acid sulfosalicilic este considerată cea mai potrivită pentru detectarea proteinuriei patologice. În prezent, testul de fierbere nu este utilizat în mod practic datorită laboriosității și duratei sale.

Metode semi-cantitative

Metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov se bazează pe testul inelului Geller, astfel încât aceleași erori se observă și prin această metodă ca și în cazul testului Geller.

În prezent, benzile de diagnosticare sunt utilizate din ce în ce mai mult pentru a determina proteinele urinare. Pentru determinarea semi-cantitativă a proteinei în urină pe o bandă, colorantul cel mai frecvent utilizat este albastru de bromfenol în tampon citrat. Conținutul de proteine ​​din urină este evaluat prin intensitatea culorii albastru-verzui, care se dezvoltă după contactul zonei de reacție cu urină. Rezultatul este evaluat vizual sau cu ajutorul analizorilor de urină. În ciuda popularității mari și a avantajelor evidente ale metodelor de chimie uscată (simplitate, viteză de analiză), aceste metode de analiză a urinei în general și de determinare a proteinei în special nu sunt fără defecte grave. Una dintre ele, care duce la o distorsionare a informațiilor de diagnosticare, este sensibilitatea mai mare a indicatorului albastru de bromofenol la albumină în comparație cu alte proteine. În acest sens, benzile de testare sunt adaptate în principal la detectarea proteinuriei glomerulare selective, când aproape toată proteina din urină este reprezentată de albumină. Odată cu progresia schimbărilor și trecerea proteinuriei glomerulare selective la neselectivă (apariția globulinelor în urină), rezultatele determinării proteinei sunt subestimate comparativ cu valorile reale. Acest fapt face imposibilă utilizarea acestei metode pentru determinarea proteinelor în urină pentru a evalua starea rinichilor (filtrul glomerular) în timp. În proteinuria tubulară, rezultatele determinării proteinei sunt, de asemenea, subestimate. Determinarea proteinei folosind benzi de diagnosticare nu este un indicator fiabil al nivelurilor scăzute de proteinurie (majoritatea benzilor de diagnostic disponibile în prezent nu au capacitatea de a prinde proteine ​​în urină la o concentrație mai mică de 0,15 g / l). Rezultatele negative ale determinării proteinei pe dungi nu exclud prezența globulinelor, hemoglobinei, uromucoidei, proteinei Bens-Jones și a altor paraproteine ​​în urină.

Flacoanele de mucus cu un conținut ridicat de glicoproteine ​​(de exemplu, în procesele inflamatorii din tractul urinar, piurie, bacteriurie) se pot depune pe zona indicator a benzii și pot duce la rezultate fals pozitive. Rezultatele pozitive false pot fi, de asemenea, asociate cu o concentrație mare de uree. Iluminarea slabă și percepția slabă a culorii pot provoca rezultate inexacte.

În acest sens, utilizarea benzilor de diagnosticare ar trebui să se limiteze la procedurile de screening, iar rezultatele obținute cu ajutorul acestora ar trebui considerate doar ca indicative.

Metode cantitative

Determinarea cantitativă corectă a proteinelor în urină în unele cazuri nu este o sarcină ușoară. Dificultățile soluționării sale sunt determinate de următorul număr de factori:

• conținut scăzut de proteine ​​în urina unei persoane sănătoase, adesea pe pragul de sensibilitate al celor mai cunoscute metode;
• prezența în urină a multor compuși care pot interfera cu evoluția reacțiilor chimice;
• fluctuațiile semnificative în conținutul și compoziția proteinelor urinare în diferite boli care fac dificilă alegerea unui material de calibrare adecvat.

În laboratoarele clinice se folosesc în mod predominant metodele așa-numite "de rutină" pentru determinarea proteinei în urină, dar ele nu oferă întotdeauna rezultate satisfăcătoare.

Din punctul de vedere al unui analist de specialitate care lucrează în laborator, metoda destinată determinării cantitative a proteinei din urină trebuie să îndeplinească următoarele cerințe:

• au o relație liniară între absorbția complexului format în timpul reacției chimice și conținutul de proteine ​​din probă într-o gamă largă de concentrații, evitând astfel operații suplimentare în pregătirea eșantionului pentru studiu;
• ar trebui să fie simplu, nu necesită performerul cu înaltă calificare, să fie executat cu un număr mic de operațiuni;
• au o înaltă sensibilitate, fiabilitate analitică atunci când se utilizează cantități mici de material studiat;
• să fie rezistent la diverși factori (variații ale compoziției eșantionului, prezența drogurilor etc.);
• au un cost acceptabil;
• să fie ușor de adaptat la analizoarele automate;
• rezultatul determinării nu trebuie să depindă de compoziția proteică a probei de urină.

Nici una dintre metodele actuale cunoscute pentru determinarea cantitativă a proteinelor în urină nu poate fi pe deplin pretinse a fi "standardul de aur".

Metodele cantitative pentru determinarea proteinei în urină pot fi împărțite în turbidimetrice și colorimetrice.

Metode turbidimetrice

Metodele turbidimetrice includ:

• determinarea proteinei cu acid sulfosalicilic (SSC),
• determinarea proteinei cu acid tricloracetic (THC),
• determinarea proteinei cu clorură de benzetoniu.

Metodele turbidimetrice se bazează pe reducerea solubilității proteinelor urinare datorită formării unei suspensii de particule în suspensie sub influența agenților de precipitare. Conținutul de proteine ​​din eșantionul de testare este evaluat fie prin intensitatea dispersiei luminii determinată de numărul particulelor de dispersie a luminii (metoda neelometrică de analiză), fie prin atenuarea fluxului de lumină prin suspensia rezultată (metoda turbidimetrică de analiză).

Mărimea împrăștierii luminii în metodele de precipitare a detectării proteinei în urină depinde de mulți factori: viteza de amestecare a reactivilor, temperatura amestecului de reacție, pH-ul mediului, prezența compușilor străini, metodele de fotometrie. Atenția aderentă la condițiile de reacție contribuie la formarea unei suspensii stabile cu o dimensiune constantă a particulelor și obținerea unor rezultate relativ reproductibile.

Unele medicamente afectează rezultatele metodelor turbidimetrice pentru determinarea proteinelor în urină, ducând la așa-numitele rezultate "false-pozitive" sau "false-negative". Acestea includ unele antibiotice (benzilpenicilină, cloxacilină, etc.), substanțe radiopatice cu conținut de iod, medicamente cu sulf.

Metodele turbidimetrice sunt slabe standardizate, adesea ducând la rezultate eronate, dar, în ciuda acestui fapt, ele sunt acum utilizate pe scară largă în laboratoare datorită costului scăzut și disponibilității reactivilor. Metoda cea mai răspândită în Rusia este determinarea proteinei cu acid sulfosalicilic.

Metode colorimetrice

Cele mai sensibile și mai precise sunt metodele colorimetrice pentru determinarea proteinei totale din urină, pe baza reacțiilor specifice de proteine ​​colorate.

Acestea includ:

1. biuret reacție,
2. Metoda Lowry
3. metode bazate pe capacitatea diferitelor coloranți de a forma complexe cu proteine:
   • Ponceau S (Ponceau S),
   • Coomassie Brilliant Blue Coomassie Albastru strălucitor
   • Pyrogallol roșu.

Din punctul de vedere al interpretului, în activitatea zilnică a laboratorului cu un flux mare de cercetare, metoda biuret este incomodă datorită numărului mare de operații. În același timp, metoda este caracterizată printr-o fiabilitate analitică ridicată, permite determinarea proteinei într-o gamă largă de concentrații și detectarea albuminei, globulinelor și paraproteinelor cu sensibilitate comparabilă, ca urmare a faptului că metoda biuret este considerată ca referință și este recomandată pentru compararea altor metode analitice pentru detectarea proteinei în urină. Metoda biuretului de determinare a proteinei în urină se efectuează, de preferință, în laboratoare care deservesc departamentele de nefrologie și se utilizează în cazurile în care rezultatele determinării folosind alte metode sunt discutabile, precum și pentru a determina cantitatea de pierdere zilnică de proteine ​​la pacienții nefrologici.

Metoda Lowry, care are o sensibilitate mai mare decât metoda biuret, combină reacția biuret cu reacția Folin la aminoacizii tirozină și triptofan în molecula de proteină. În ciuda sensibilității ridicate, această metodă nu oferă întotdeauna rezultate fiabile atunci când se determină conținutul de proteine ​​în urină. Motivul pentru aceasta este interacțiunea nespecifică a reactivului Folin cu componente non-proteice ale urinei (cel mai adesea aminoacizi, acid uric, carbohidrați). Separarea acestor și a altor componente ale urinei prin dializă sau precipitarea proteinelor permite folosirea cu succes a acestei metode pentru determinarea cantitativă a proteinei urinare. Unele medicamente - salicilații, clorpromazina, tetraciclinii sunt capabili să influențeze această metodă și să distorsioneze rezultatele studiului.

Sensibilitatea suficientă, reproductibilitatea bună și ușurința de determinare a proteinei prin coloranți de legare fac ca aceste metode să fie promițătoare, dar costul ridicat al reactivilor împiedică utilizarea lor mai largă în laboratoare. În prezent, metoda roșie de pirogalol devine din ce în ce mai frecventă în Rusia.

Atunci când se efectuează un studiu al nivelului proteinuriei, trebuie avut în vedere că diferite metode pentru determinarea proteinuriei au sensibilitate și specificitate diferite față de numeroasele proteine ​​urinare.

Pe baza datelor empirice, se recomandă determinarea proteinei prin două metode diferite și calcularea valorii reale folosind una dintre următoarele formule:

proteinurie = 0,4799 B + 0,5230 L;
proteinurie = 1,5484 B - 0,4825 S;
proteinurie = 0,2167 S + 0,7579 L;
proteinurie = 1,0748 P - 0,0986 B;
proteinurie = 1,0104 P - 0,0289 S;
proteinurie = 0,8959 P + 0,0845 L;

în cazul în care:
B - rezultat de măsurare cu Coomassie G-250;
L este rezultatul măsurării cu reactivul lui Lowry;
P - măsurarea rezultatelor cu molibdat de pirogalol;
S este rezultatul măsurării cu acid sulfosalicilic.

Având în vedere fluctuațiile marcate în nivelul proteinuriei la diferite momente ale zilei, precum dependența concentrației proteinelor în urină din diureza, diverse conținutului său în probele de urină individuale în prezent în patologia renală luate pentru a evalua severitatea proteinuriei la o pierdere zilnică de proteine ​​în urină, adică pentru a determina așa-numitele proteinurie zilnică. Se exprimă în g / zi.

Dacă este imposibilă colectarea zilnică a urinei, se recomandă determinarea concentrației de proteină și creatinină într-o singură porție de urină. Deoarece rata de eliberare a creatininei în timpul zilei este destul de constantă și nu depinde de modificările ratei urinării, raportul dintre concentrația proteinei și concentrația creatininei este constant. Acest raport se corelează bine cu excreția zilnică a proteinei și, prin urmare, poate fi utilizat pentru a evalua severitatea proteinuriei. Raportul normal al proteinei / creatininei trebuie să fie mai mic de 0,2. Proteina și creatinina sunt măsurate în g / l. Un avantaj important al metodei de evaluare a severității proteinuriei prin raportul proteină-creatinină este eliminarea completă a erorilor asociate cu incapacitatea sau colectarea incompletă a urinei zilnice.

Referințe:

• O. V. Novoselova, M. B. Pyatigorskaya, Yu. E. Mihailov, "Aspecte clinice ale detecției și evaluării proteinuriei", Manual al șefului CPL, nr.1, ianuarie 2007
• A. V. Kozlov, "Proteinuria: metode pentru detectarea ei", lectură, Sankt Petersburg, SPbMAPO, 2000
• VL Emanuel, "Diagnosticul de laborator al bolii renale. Sindromul urinar ", - Manualul șefului KDL, nr.12, decembrie 2006
• VI Pupkova, L.M. Prasolov - Determinarea proteinelor în urină și lichidul cefalorahidian. Koltsovo, 2007
• Manual de metode clinice de cercetare în laborator. Ed. E. A. Kost. Moscova, "Medicina", 1975

Articole înrudite

Metode cantitative pentru determinarea proteinei urinare totale

Orice eșantion de urină este adecvat pentru cuantificarea proteinei. Majoritatea cercetătorilor preferă să determine cantitatea de proteină din urină colectată pe zi pentru a determina pierderea zilnică de proteine.

Secțiunea: Analiza urinei

Metode semi-cantitative pentru determinarea proteinei totale în urină

În prezent, benzile de diagnosticare sunt utilizate din ce în ce mai mult pentru a determina proteinele urinare. Pentru determinarea semi-cantitativă a proteinei în urină pe o bandă, colorantul cel mai frecvent utilizat este albastru de bromfenol în tampon citrat. Conținutul de proteine ​​din urină este evaluat prin intensitatea culorii albastru-verzui, care se dezvoltă după contactul zonei de reacție cu urină.

Secțiunea: Analiza urinei

Metode calitative pentru determinarea proteinei totale în urină

Toate probele de proteine ​​de urină de înaltă calitate se bazează pe capacitatea proteinelor de a denatura sub influența factorilor fizici și chimici diferiți. În prezența proteinei din proba de urină, există fie turbiditate, fie pierderea sedimentului floculant.

Secțiunea: Analiza urinei

Determinarea proteinei urinare în probă cu 20% acid sulfosalicilic

Proba cu acid sulfosalicilic 20% se referă la reacțiile calitative pentru determinarea proteinei în urină. Deoarece se bazează pe reacția de coagulare, urina testată trebuie să îndeplinească anumite cerințe: să fie transparentă și să aibă o reacție acidă.

Secțiunea: Analiza urinei

Testul inelului Geller

Testul cu inel Geller este o reacție calitativă pentru determinarea proteinei urinare. Deoarece se bazează pe reacția de coagulare, urina testată trebuie să îndeplinească anumite cerințe: să fie transparentă și să aibă o reacție acidă.

Secțiunea: Analiza urinei

Metode de determinare a proteinei în urină

O cantitate mică de proteine ​​în urina zilnică se regăsește, de asemenea, la indivizi complet sănătoși, cu toate acestea, astfel de mici concentrații nu sunt detectate în porțiuni singulare utilizând metodele utilizate în prezent. Aproximativ 70% din proteinele urinare ale unui om sănătos reprezintă uromucoidul, o proteină care este un produs al țesutului renal; astfel, proporția proteinei glomerulare din urină a oamenilor sănătoși este neglijabilă, iar proteinuria este în mod normal 50-150 mg / zi, cu cele mai multe proteine ​​din urină identice cu zerul.

Este acceptat să se facă distincția între următoarele forme de proteinurie, în funcție de locul de origine: prerenal, asociat cu defalcarea proteinei tisulare îmbunătățite, hemoliză severă; renal, datorită patologiei rinichilor, care poate fi împărțită în glomerul și tubular; postrenal, asociat cu patologia tractului urinar și cel mai adesea cauzat de exudarea inflamatorie.

În funcție de durata existenței proteinurie constante izolate, existente timp de mai multe săptămâni și chiar ani, și tranzitorie, care apar periodic, uneori, chiar și în absența unei boli renale, cum ar fi febră și intoxicație severă. Se recomandă deosebirea între variabilitatea proteinuriei: cu o pierdere zilnică de proteine ​​de până la 1 g - moderată, de la 1 la 3 g - mediu și mai mult de 3 g - pronunțată.

Detectarea în urină a proteinelor cu o greutate moleculară relativ mare indică absența selectivității filtrului renal și daunele sale pronunțate. În aceste cazuri, vorbiți despre selectivitatea scăzută a proteinuriei. Prin urmare, în prezent, definiția fracțiunilor de proteine ​​din urină a devenit larg răspândită. Metodele cele mai exacte sunt electroforeza în gelurile de amidon și poliacrilamidă.
Conform rezultatelor obținute prin aceste metode, se poate judeca selectivitatea proteinuriei.

Majoritatea metodelor calitative și cantitative pentru determinarea proteinelor în urină se bazează pe coagularea lor în volumul de urină sau la interfața dintre medii (urină și acid); dacă există o modalitate de a măsura intensitatea coagulării, atunci eșantionul devine cantitativ.

Un test de acid sulfosalicilic unificat:

Reactivul necesar:

20% soluție de acid sulfosalicilic.

Cursul studiului:

În 2 eprubete se toarnă 3 ml de urină filtrată. În eprubeta adăugați 6-8 picături de reactiv. Pe un fundal închis la culoare, comparați tubul de control cu ​​un pacient experimentat. Turbiditatea în eprubeta indică prezența proteinei, eșantionul este considerat pozitiv.

Dacă reacția urinei este alcalină, înainte de examinare se acidulează cu 2-3 picături dintr-o soluție apoasă de acid acetic 10%.

Metoda Unificată Brandberg-Roberts-Stolnikov:

Metoda se bazează pe proba inelului Geller, care constă în faptul că la granița dintre acidul azotic și urină, în prezența proteinelor, apare coagularea și apare un inel alb.

Reactivul necesar:

Soluție 30% de acid azotic (densitate relativă 1,2) sau reactiv Larionic.
Prepararea reactivului Larion: 20-30 g de clorură de sodiu se dizolvă prin încălzire în 100 ml de apă distilată, se lasă să se răcească, se filtrează. La 99 ml de filtrat se toarnă 1 ml de acid azotic concentrat.

Cursul studiului:

Se toarnă 1-2 ml de acid azotic (sau reactiv cu acidul larionic) în tub și cu atenție, peste peretele tubului, se stratifică aceeași cantitate de urină filtrată. Apariția unui inel alb subțire la interfața a două lichide între minutul 2 și 3 indică prezența proteinei la o concentrație de aproximativ 0,033 g / l. Dacă inelul apare mai devreme de 2 minute după stratificare, urina trebuie diluată cu apă și re-stratificată cu urină deja diluată. Gradul de diluare a urinei este ales în funcție de tipul de inel, adică lățimea, compactitatea și timpul de apariție. Cu un inel asemănător firului, care a apărut mai devreme de 2 minute, urina este diluată de 2 ori, cu o lățime - de 4 ori, cu un compact - de 8 ori, etc. Concentrația proteinei se calculează prin înmulțirea 0,033 cu viteza de diluare și se exprimă în grame per 1 l (g / l).

Uneori se obține un inel alb atunci când sunt prezente cantități mari de uree. Spre deosebire de inelul proteic, uratul este puțin mai mare decât limita dintre două lichide și se dizolvă atunci când este ușor încălzit.

Determinarea cantitativă a proteinei în urină prin turbiditate, formată prin adăugarea de acid sulfosalicilic:

Principiul metodei:

Intensitatea turbidității în timpul coagulării proteinelor cu acid sulfosalicilic este proporțională cu concentrația sa.

Reactivi necesari:

1. soluție de acid sulfosalicilic 3%.

2. soluție de clorură de sodiu 0,9%.

3. Soluție de albumină Standard - soluție 1% (1 ml dintr-o soluție conținând 10 mg albumină) 1 g albumină liofilizată (de la bovine sau ser uman) a fost dizolvat într-o cantitate mică de soluție de clorură de sodiu 0,9%, în balon cu 100 ml, după care se ajustează la semn cu aceeași soluție. Reactivul este stabilizat prin adăugarea a 1 ml de soluție de azidă de sodiu 5% (NaN3). Când este păstrat în frigider, reactivul este valabil timp de 2 luni.

Echipament special - colorimetru fotoelectric.

Cursul studiului:

1,25 ml urină filtrată se introduce într-un tub de testare, se completează până la 5 ml cu soluție de acid sulfosalicilic 3% și se amestecă. După 5 minute, acestea sunt măsurate pe un colorimetru fotoelectric la o lungime de undă de 590-650 nm (filtru de lumină portocalie sau roșie) împotriva unui control într-o celulă cu o lungime a căii optice de 5 mm. Controlul este un tub în care se adaugă 1,25 ml de urină filtrată până la 5 ml de soluție de clorură de sodiu 0,9%. Calculul se efectuează în conformitate cu programul de etalonare, pentru construcția căruia se prepară diluții din soluția standard, după cum se indică în tabel.

Din fiecare soluție rezultată, se prelevează 1,25 ml și se tratează ca probe experimentale.

În cazul în care se construiește un grafic de calibrare, se păstrează dependența rectilinie până la 1 g / l. La concentrații mai mari, eșantionul trebuie diluat și trebuie luat în considerare diluția în calcul.

Rezultate fals pozitive pot fi obținute dacă există substanțe de contrast în urină conținând iod organic. Prin urmare, testul nu poate fi utilizat la persoanele care iau preparate de iod; un rezultat pozitiv fals poate fi de asemenea datorat preparatelor de sulfanilamidă, dozelor mari de penicilină și concentrațiilor mari în urină de acid uric.

Metoda biuret:

Principiul metodei:

Legăturile peptidice ale proteinei cu săruri de cupru în alcalin C formează un complex de culoare purpurie. Proteinele sunt pre-precipitate cu acid tricloracetic.

Reactivi necesari:

1. soluție 10% de acid tricloroacetic.
2. 20% soluție de cupru (CuSO4 · 5H2O).
3. soluție de NaOH 3%.

Cursul studiului:

La 5 ml de urină prelevată din cantitatea zilnică, se adaugă 3 ml de soluție de acid tricloracetic, se centrifughează la un volum constant de sedimente. Supernatantul este aspirat cu o pipetă, precipitatul este apoi dizolvat în 5 ml de soluție de NaOH. La soluție se adaugă 0,25 ml de CuS04, amestecul este agitat și centrifugat. Supernatantul este fotometrat la o lungime de undă de 540 nm într-o cuvă cu o lungime de cale optică de 10 mm față de apa distilată. Concentrația proteinei se calculează pe baza curbei de calibrare, în timp ce se compară, concentrația proteinei (g / l) este reprezentată grafic pe axa y și densitatea optică în unitățile de extincție pe axa absciselor. Pe baza concentrației obținute, se calculează pierderea zilnică de proteine ​​în urină.

Utilizarea hârtiei indicator (benzi):

Proteinele pot fi detectate folosind hârtie indicatoare (benzi), produse de Albuphan, Ames (Anglia), Albustix, Boehringer (Germania), Comburtest etc.

Principiul se bazează pe fenomenul așa-numitei erori de proteine ​​a unor indicatori bazați pe aciditate. Partea indicator a hârtiei este saturată cu albastru tetrabromfenol și tampon citrat. Când hârtia este umezită, tamponul se dizolvă și asigură pH-ul adecvat pentru reacția indicatorului.

La grupurile de aminoacizi 3.0-3.5, aminoacizii reacționează cu indicatorul și modifică culoarea galbenă originală spre un albastru verzui, după care, comparând cu scala de culoare, este posibilă estimarea aproximativă a concentrației proteinei în urină. Principala condiție prealabilă pentru funcționarea corectă a benzilor indicatoare este asigurarea unui pH în intervalul de 3,0-3,5 pentru ca reacția să aibă loc.

Dacă hârtia este în contact cu urina studiată mai mult decât expunerea specificată în instrucțiuni, tamponul citrat se dizolvă în acesta și apoi indicatorul reacționează la pH-ul real al urinei, adică dă o reacție fals pozitivă. Datorită faptului că capacitatea tamponului este limitată, chiar dacă liniile directoare sunt urmărite în eșantioane de urină prea alcalină (pH> 6,5), se obțin rezultate fals pozitive și în probe de urină prea acidă (pH 6,5), cu o densitate relativă scăzută urină și la o concentrație scăzută de proteine ​​bens jones.

Reactivi necesari:

Tampon de acetat de 2 M pH 4,9.

Cursul studiului:

Urina filtrată în cantitate de 4 ml este amestecată cu 1 ml de soluție tampon și încălzită timp de 15 minute într-o baie de apă la o temperatură de 56 ° C. În prezența proteinelor Bens-Jones, apare un precipitat pronunțat în 2 minute și dacă concentrația proteinei Bens-Jones este mai mică de 3 g / l, proba poate fi negativă. În practică, acest lucru este extrem de rar, deoarece în cea mai mare parte concentrația de proteină Bens-Jones în urină este semnificativă.

Cu toată certitudinea, proteina Bens-Jones poate fi detectată printr-un studiu imunoelectroforetic utilizând seruri specifice împotriva lanțurilor grele și ușoare ale imunoglobulinelor.

Determinarea albumozei (proteoza):

Albumozele sunt produse de scindare a proteinelor, principiul căruia se bazează pe faptul că nu se pliază atunci când sunt fierte, dar dau o reacție biuret pozitivă și sunt sărate cu câteva săruri, în special sulfat de amoniu și acetat de zinc într-un mediu acid.

Urina normală nu conține albumoză. Urmele pot fi în urină normală în cazul impurităților de material seminal. În patologie, albumoza poate apărea în urină în condiții febrile, transfuzii de sânge și plasmă, resorbție a exudatelor și transudatelor și dezintegrarea tumorilor.

Reactivi necesari:

1. Soluție de clorură de sodiu saturată.
2. Soluție concentrată de sodă caustică.
3. O soluție slabă de sulfat de cupru (aproape incolor).

Cursul studiului:

O soluție saturată de clorură de sodiu (volum 1/3) se adaugă la urină acidificată cu acid acetic, se fierbe și se filtrează lichidul fierbinte. Albumozele trec în filtrat, în care prezența lor este determinată de o reacție biuret. La filtrat se adaugă 1/2 volum dintr-o soluție concentrată de sodă caustică și câteva picături dintr-o soluție slabă de sulfat de cupru. Cu o mostră pozitivă, se obține o culoare roșu-violet.

Cu un test pozitiv cu acid sulfosalicilic, urina este încălzită. Dacă turbiditatea dispare și reapare când este răcită, înseamnă că urina conține albumoze sau corpul proteic al lui Bens-Jones.

Proteină în urină, teste de laborator

Metode de determinare a proteinei urinare

Pentru clinică, atât determinarea calitativă cât și cantitativă a proteinei în urină.

Teste calitative pentru determinarea proteinei urinare
Propuse mai mult de 100 de reacții pentru determinarea calitativă a proteinelor în urină. Cele mai multe dintre ele se bazează pe precipitarea proteinelor prin mijloace fizice (încălzire) sau chimice. Prezența proteinei este dovedită de aspectul turbidității.

De asemenea, sunt de interes proba colorimetrică uscată.

Mai jos vor fi descrise doar cele mai importante pentru practica eșantionului.

Test de acid sulfosalicilic. La câțiva mililitri de urină se adaugă 2-4 picături dintr-o soluție de acid sulfosalicilic de 20%. Atunci când apare o reacție pozitivă turbiditatea. Rezultatul este marcat de termeni: opalescență, reacție slabă pozitivă, pozitivă sau puternic pozitivă. Testul cu acid sulfosalicilic este unul dintre cele mai sensibile probe pentru stabilirea proteinelor în urină. Ea găsește chiar și cele mai mici creșteri anormale ale proteinei urinare. Datorită unei simple tehnici, acest test a găsit o aplicație largă.

Testați cu aseptol. Aseptolul este un substitut al acidului sulfosalicilic. Poate fi preparat din materiale disponibile în orice laborator (fenol și acid sulfuric). Ca reactiv, se folosește o soluție de 20% aseptol. Testul se efectuează după cum urmează: într-un tub de testare care conține 2-3 ml de urină, se adaugă 0,5-1-1 ml de soluție de aseptol la fund. Dacă un inel alb de proteine ​​coagulate se dovedește la limita dintre două lichide, eșantionul este pozitiv.

Testul lui Geller. Sub câteva mililitri de urină, 1-2 ml de acid azotic 30% (greutate specifică de 1,20) sunt sărate. Dacă se produce un inel alb la interfața ambelor lichide, eșantionul este pozitiv. Reacția devine pozitivă dacă proteina este mai mare de 3,3 mg%. Uneori se obține un inel alb atunci când sunt prezente cantități mari de uree. Spre deosebire de inelul proteic, inelul urat nu apare la limita dintre cele două lichide, dar ușor mai mare. Larionova propune utilizarea în loc de 30% acid azotic ca reactiv 1% soluție de acid azotic într-o soluție saturată de clorură de sodiu; Acest lucru oferă economii mari în acidul azotic.

Se prelevează cu potasiu și acid acetic zhelezisstosinerodisty. Această reacție face posibilă izolarea proteinelor serice de nucleoalbumină.

Cantități egale de urină sunt turnate în două tuburi. În unul dintre ele se adaugă câteva picături de soluție de acid acetic 30%. Dacă se obține turbiditate în comparație cu tubul de control, urina conține nucleoalbumină. Dacă nu apare turbiditate, conținutul ambelor tuburi este amestecat și din nou împărțit în două părți. În una din cele două eprubete, adăugați câteva picături (un exces poate transforma o mostră pozitivă într-una negativă) a unei soluții de 10% din sarea de sânge galben (sirop de ferocianură de potasiu). În prezența proteinelor din zer, se obține turbiditate.

În cazul urinei concentrate care conține cantități mari de acid uric și uree, trebuie efectuată o probă cu potasiu și acid acetic feric și sirop, după diluarea preliminară (de 2-3 ori) a urinei cu apă. În caz contrar, pot să apară turbidități cauzate de acidul uric precipitat.

Acest lucru este deosebit de important în studiul urinei la sugari, care conține o mulțime de acid uric și uree.

Din restul probelor calitative pentru proteine ​​în urină, pe baza precipitării proteinelor, au fost găsite aplicații: testul de fierbere, Esbach, Perdi, Roberts, Almen, Balloni, Buro, Claudius, Corso, Dome, Goodmann-Suzanne, Jolla, Exton, Kamlet, Kobuladze, Liliendal-Petersen, Polacci, Pons, Spiegler, Tanre, Thiele, Brown, Tsushia etc.

În producția probelor de înaltă calitate pentru proteine ​​în urină, pe baza depunerii de proteine, este necesar să se respecte următoarele reguli generale, încălcarea cărora duce la erori semnificative în studiu.

1. Urina care trebuie testată trebuie să fie acidă. Cu o reacție alcalină, urina este ușor acidificată cu acid acetic. Producerea unei probe cu urină alcalină în cazurile în care un acid este utilizat ca reactiv poate duce la neutralizarea acidului și la un rezultat negativ cu o reacție pozitivă. Acest lucru este valabil mai ales pentru testul acidului sulfosalicilic, deoarece acidul este adăugat în cantități foarte mici și poate fi ușor neutralizat.

2. Urina investigată trebuie să fie transparentă.

3. Probele pentru stabilirea proteinei în urină trebuie întotdeauna efectuate în două tuburi, dintre care unul servește drept control. Fără un tub de control, este posibil să nu observați turbiditatea luminii în timpul reacțiilor.

4. Cantitatea de acid adăugat în eșantioane nu trebuie să fie prea mare. O cantitate mare de acid poate duce la formarea acidolbuminei solubile și la transformarea unei probe pozitive într-una negativă.

Datorită tehnicii lor simple, eșantioanele colorimetrice uscate merită multă atenție. Când se utilizează aceste mostre, efectul pe care proteina îl are asupra culorii indicatorului în soluția tampon (așa-numitele indicatoare de eroare de proteine). O hârtie de filtru infuzată cu tampon de acid citric și albastru de bromfenol ca indicator este absorbită în urină pentru o perioadă scurtă de timp. Eșantionul este pozitiv dacă se transformă în culoarea albastru-verde. Comparând intensitatea colorării cu standardele de hârtie colorată, este posibil să se deducă concluzii aproximative și cantitative. Indicatorul de hârtie este vândut în ambalaje cu standardele de culoare corespunzătoare, cum ar fi hârtia indicatoare universală.

Metode de determinare cantitativă a proteinei urinare
Au fost propuse numeroase metode pentru determinarea cantitativă a proteinei urinare. Metodele cantitative exacte pentru determinarea proteinelor din materialul biologic nu sunt utilizate pe scară largă în determinarea proteinelor în urină, datorită tehnicilor complexe și consumatoare de timp. Metodele volumetrice sunt larg răspândite, în special metoda Esbach. Ele sunt foarte simple, dar, din păcate, nu sunt foarte precise. Metodele grupului Brandberg-Stolnikov, care oferă rezultate mai precise decât metodele volumetrice, cu o tehnică relativ simplă, sunt de asemenea convenabile pentru clinică. În prezența unui fotometru sau a unui nephelometru, metode nephelometrice sunt de asemenea convenabile.

Metoda Esbach. El a fost propus de medicul parizian Esbach în 1874. Se toarnă urina și reactivul într-o eprubetă specială (albumina lui Esbach). Tubul este etanșat cu un dop din cauciuc, agitat bine (fără bătăi!) Și lăsat într-o poziție verticală până a doua zi. Raportați diviziunea, care ajunge la coloana de precipitat de proteine. Numărul găsit arată conținutul de proteine. Este foarte important prin metoda Esbach că urina este acidă. Urina alcalină poate neutraliza constituenții acide ai reactivului și poate preveni precipitarea proteinelor.

Avantajele metodei: este simplu și convenabil în practică.

Dezavantaje: metoda este inexactă, rezultatul este obținut după 24 - 48 de ore.

Metoda Brandberg-Stolnikov. Se bazează pe testul de calitate al lui Geller. Proba Geller poate fi utilizată pentru determinare cantitativă, deoarece dă un rezultat pozitiv cu un conținut de proteine ​​de peste 3,3 mg%. Aceasta este concentrația finală a proteinei sub care eșantionul devine negativ.

Modificarea lui Ehrlich și Althausen. oamenii de știință sovietici SL Ehrlich și A. Ya Altgauzen modificată metoda Brandberg-Stolnikova, indicând posibilitatea de a simplifica cercetare și economii de timp în producția sa.

Prima simplificare este asociată cu timpul inelului. Se determină exact momentul apariției sale, fără a se adera neapărat la minutele 2 și 3.

Cea de-a doua simplificare permite stabilirea felului de reproducere care trebuie făcută. Autorii au demonstrat că diluția necesară poate fi stabilită aproximativ prin tipul de inel obținut. Ele disting filamentos, larg
și inel compact.

Dintre metodele nefelometrice, metoda Kingsberry și Clark merită să fie remarcată. 2,5 ml de urină filtrată se toarnă într-un cilindru mic gradat, reumplut cu soluție apoasă 3% de acid sulfosalicilic la 10 ml. Se amestecă bine și, după 5 minute, se fotometerizează într-o cuvă de 1 cm, cu un filtru galben, folosind apă ca lichid de compensare. Cu fotometrul Pulfrich, extincția găsită, înmulțită cu 2,5, dă cantitatea de proteină în% o. În cazul în care indicele de extincție este mai mare de 1,0, urina este pre-diluată de 2 ori, de 4 ori sau chiar mai mult.

Pentru a avea o idee clară despre cantitatea de proteine ​​excretate în urină, este necesar să se determine nu numai concentrația lor într-o porțiune separată de urină, ci și cantitatea zilnică totală a acestora. Pentru a face acest lucru, colectați urina pacientului timp de 24 de ore, măsurați volumul acestuia în mililitri și determinați concentrația de proteină într-o porție de urină zilnică în g%. Cantitatea de proteine ​​excretată în urină în 24 de ore este determinată în funcție de cantitatea zilnică de urină exprimată în grame.

Semnificația clinică a proteinelor în urină

Urina umană conține, în mod normal, cantități minime de proteine ​​care nu pot fi stabilite prin eșantioane normale de testare a proteinelor urinare calitative. Excreția unor cantități mari de proteine, în care probele obișnuite de înaltă calitate pentru proteinele din urină devin pozitive - un fenomen anormal, numit proteinurie. Proteinuria este fiziologică numai la nou-născut, în primele 4-10 zile după naștere. Denumirea albuminurie, folosită în mod obișnuit, este greșită, deoarece nu numai albumina, ci și alte tipuri de proteine ​​(globuline, etc.) sunt excretate în urină.

Proteinuria, ca simptom de diagnostic, a fost descoperită în 1770 de către Cotuno.

Cea mai importantă proteinurie renală funcțională la copii este după cum urmează:

1. Proteinuria fiziologică a nou-născutului. Apare la majoritatea nou-născuților și nu are nici o semnificație adversă. Se explică printr-un filtru renal imatur, deteriorarea nașterii sau pierderea de fluide în primele zile de viață. Proteinuria fiziologică dispare în ziua 4-10 după naștere (la copiii prematur mai târziu). Cantitatea de proteine ​​este mică. Este o nucleoalbumină.

Albuminuria neonatală, care durează mult timp, poate fi un simptom al evenimentelor congenitale.

2. Albuminurie cerebrală. Acestea sunt cauzate de depășirea pragului normal de iritabilitate filtru renal considerabil mecanice, termice, stimuli mentale și alte chimicale, - pierderea de lichide la sugari (Deshidratarea proteinurie), baie rece, alimente abundente, continut ridicat de proteine ​​(proteinurie alimentară), rinichiului palparea (palparea albuminuria) suprasolicitate fizic, frica, etc.

Accident vascular cerebral albuminurie mai ușor apar la copii la o vârstă fragedă decât cele din copil mai în vârstă și de adult, deoarece rinichii de sugari și copii mici sunt mai usor de iritatii. Deshidratarea albuminuriei (tulburări de alimentație, hidrolabilitate, toxicoză, diaree, vărsături) este deosebit de frecventă la sugari.

Accident vascular cerebral albuminurie este benigna. Ele dispar imediat după eliminarea cauzelor lor. Ocazional, leucocitele, cilindrii și celulele roșii sunt uneori găsite în sedimente. Proteina este de cele mai multe ori o nucleoalbumină.

3. Proteuuria ortostatică. Această condiție este caracteristică copiilor de vârstă preșcolară și școlară. Se produce pe baza tulburărilor vasomotorii în alimentarea cu sânge a rinichiului. Tipic pentru albuminuria ortostatică (de aici și numele ei) este că apare numai atunci când copilul este în picioare, când coloana vertebrală este într-o poziție lordotică. În poziția în sus, dispare. Nucleoalbumina este eliberată. În cazurile îndoielnice, puteți recurge la experiența ortostatică, care constă în următoarele: seara, cu o oră înainte de culcare, copilul golește vezica; dimineața, coborând din pat, eliberează din nou urină. Această urină nu conține proteine. Apoi, copilul este pus în genunchi timp de 15-30 minute, cu un băț în spatele lui, între coatele ambelor mâini îndoite. Creează o poziție de lordoză, care duce la eliberarea de proteine, fără modificări ale sedimentelor.

Cu albuminuria ortostatică, 8-10 g de proteine ​​pot fi eliberate pe zi.

Proteinuria renală organică are o importanță clinică majoră între toată proteinuria. Acestea sunt cauzate de boli renale organice (nefrită, nefroză, nefroscleroză). Proteinuria este unul dintre cele mai importante și cele mai cunoscute simptome ale bolii organice de rinichi.

1. În glomerulonefrita acută și cronică, proteinuria apare regulat. Cantitatea de proteine ​​este moderată și nu există nici o paralelă între gradul de proteinurie și severitatea bolii. În contrast, jad cronică și mai severă apare adesea cu cantități mai mici de proteine ​​decât acute. După nefrita acută, uneori, în decursul unui timp îndelungat (ani), plasarea unei mici cantități de proteine ​​în urină, fără semnificație patologică ( „albuminuria rezidual“). Nu trebuie uitat că se poate produce și "nefrită fără proteinurie". Uneori, proteina se găsește într-o porție de urină, iar în alta nu este. Raportul dintre albumină și globuline în nefrita acută este scăzut, iar în nefrită cronică este mai mare.

2. În caz de nefroscleroză, cantitatea de proteine ​​din urină este nesemnificativă, se găsesc adesea formele bolii fără proteine ​​în urină.

3. Din toate bolile renale, nefroza are loc cu cea mai pronunțată proteinurie.

4. În cazul unor afecțiuni infecțioase și toxice se găsesc așa-numitele proteinurie febrile și toxice. Acestea sunt nefroza acută, în care cantitatea de proteină este mică. Pentru acest grup fac parte, și proteinurie în stări convulsive (convulsii), cu hipertiroidism, icter, enterocolite invaginației, arsuri, anemie severă, și așa mai departe.. Acestea sunt benigne și albuminuriei trec repede (albuminurie tranzitorie).

5. Când sângele stagnează în rinichi, apare așa numita albuminurie congestivă, care este caracteristică pacienților cardiovasculare în stadiul de decompensare. Se găsește și în ascite și tumori ale abdomenului.

În albuminuria febrilă, toxică și congestivă, permeabilitatea crescută a filtrului renal este deosebit de pronunțată. Conform unor autori, multe dintre aceste proteinurie apar fără afectarea organică a parenchimului renal.

Albuminuria extrarenală este cauzată, de obicei, de impurități proteice (secreții, celule rupte) care sunt secretate de tractul urinar bolnav și de organele sexuale. Mai multe frecvente albuminurie extrarenale tsistopielitah din cauza (piurie) duce rar concrements vulvovaginitis și tumori ale tractului urinar.

Când albuminuria extrarenală în sedimentul găsește un număr mare de leucocite și bacterii. Elementele renale aproape nu apar niciodată. Cantitatea de proteine ​​este mică. Uleiul filtrat sau centrifugat, de obicei, nu dă o probă de proteine ​​pozitivă.

La pacienții care se recuperează din pielită, albuminuria dispare după bacteriurie și pyurie.

Trebuie subliniat ca un fenomen caracteristic faptul că, în copilăria timpurie, bolile renale organice sunt extrem de rare, prin urmare, proteinuria organică este de asemenea rară. Dintre acestea se găsesc, în principal, febrile și toxice. Spre deosebire de proteinuria organică, albuminuria cerebrală este foarte frecventă la copiii mici.

La copiii mai mari, proteinuria organică este mai des funcțională. În general, cu vârsta, proteinuria funcțională este mai puțin frecventă și organică mai des.

Studii electroforetice ale proteinelor în urină

Un număr de autori utilizează metoda electroforetică pentru studiul proteinelor în urină (uroproteine). Din electrophograma obținută este clar că acestea au aceeași compoziție calitativă ca proteinele plasmatice. Acest lucru indică faptul că proteinele din urină provin de la proteinele plasmatice.

Determinarea calitativă și cantitativă a proteinei în urină.

Valori normale: proteina normală în urină este conținută în cantități minime care nu sunt detectate de reacțiile calitative obișnuite. Limita superioară a normei proteinelor în urină este de 0,033 g / l. Dacă conținutul de proteine ​​este mai mare decât această valoare, atunci probele de proteine ​​de înaltă calitate devin pozitive.

Semnificația clinică a definiției:

Apariția proteinelor în urină se numește proteinurie. Proteinuria poate fi falsă și renală. Proteinuria extrarenală poate fi în prezența impurităților de origine proteică din organele genitale (vaginită, uretrită, etc.), în timp ce cantitatea de proteină este nesemnificativă - până la 0,01 g / l. Proteinuria renală poate fi funcțională (cu hipotermie, efort fizic, febră) și organică - cu glomerulonefrită, pielonefrită, nefrită, nefroză, insuficiență renală. În proteinuria renală, conținutul de proteine ​​poate fi de la 0,033 la 10-15 g / l, uneori mai mare.

Principiul metodei: se bazează pe faptul că proteina sub acțiunea acizilor anorganici coagulează (devine vizibilă). Gradul de turbiditate depinde de cantitatea de proteine.

Detectarea proteinei în urină cu 20% acid sulfosalicilic.

Reactivi: soluție 20% de acid sulfosalicilic. Echipamente: fundal întunecat.

1. Cerințe pentru urină: urina trebuie să fie acidă (sau ușor acidă) pH, trebuie să fie transparentă, în acest scop, urina este centrifugată. Urina alcalină este acidulată într-un mediu de reacție slab acid, utilizând hârtie indicatoare pentru control.

2. În 2 tuburi de testare de același diametru se toarnă 2 ml de urină preparată. 1 tub de control - control, 2 - experiență. La eprubeta adăugați 4 picături de acid sulfosalicilic de 20%.

3. Rezultatul este marcat pe fundal închis.

4. În prezența proteinei, urina din eprubetă devine tulbure.

Determinarea de înaltă calitate a proteinei în urină prin benzi de testare.

Pentru a identifica proteinuria, sunt utilizate diferite benzi monotest: Albufan, Albustiks, Biofan E și teste politice: Triscan, Nonafan și alții.

Detectarea proteinelor în urină prin metoda lui Roberts - Stolnikov.

Principiul metodei: se bazează pe faptul că proteina sub acțiunea acizilor anorganici coagulează (devine vizibilă). Gradul de turbiditate depinde de cantitatea de proteină (adică testul cu inel Geller). Atunci când concentrația proteinei în urină este de 0,033 g / l, la sfârșitul a 3 minute de la întinderea urinei apare un fir alb subțire.

Reactivi: 50% soluție de acid azotic sau reactiv Roberts (98 părți dintr-o soluție saturată de clorură de sodiu și 2 părți acid clorhidric concentrat) sau reactivul Larionic (98 părți soluție saturată de clorură de sodiu și 2 părți acid azotic concentrat).

Echipamente: fundal întunecat.

1. Cerințe pentru urină: urina trebuie să fie acidă (sau ușor acidă) pH, trebuie să fie transparentă, în acest scop, urina este centrifugată. Urina alcalină este acidulată într-un mediu de reacție slab acid, utilizând hârtie indicatoare pentru control.

2. Se toarnă 2 ml soluție de acid azotic 50% sau unul dintre reactivi într-un tub de testare, apoi se toarnă cu grijă același volum de urină preparată de-a lungul peretelui tubului cu pipeta.

3. Eșantionul este lăsat timp de 3 minute

4. După 3 minute, raportați rezultatul. Rezultatul este marcat pe fundal închis în lumina transmisă. Dacă inelul este lată, compact, urina este diluată cu apă distilată și din nou stratată pe reactiv.

5. Urina este diluată până la 3 minute după formarea unui inel filamentar subțire.

6. Calcularea conținutului de proteine ​​în urină se obține conform formulei:

C = 0,033 g / l x grad de diluare.

194.48.155.245 © studopedia.ru nu este autorul materialelor care sunt postate. Dar oferă posibilitatea utilizării gratuite. Există o încălcare a drepturilor de autor? Scrie-ne | Contactați-ne.

Dezactivați adBlock-ul!
și actualizați pagina (F5)
foarte necesar

Dezvoltarea metodică a claselor practice "Determinarea proteinelor în urină" (1 curs)

Centrul de formare a capitalului
Moscova

Subiect: Determinarea proteinei urinare.

Obiectiv: Studiul studiului proprietatilor chimice ale urinei.

Studierea metodelor cantitative și calitative de determinare a proteinei urinare;

Aflați principiile de bază privind lucrul cu benzi de testare pe analizoarele automate.

Tipul de angajare: practic (6 ore)

Studentul ar trebui să știe:

Eșantioane calitative pentru determinarea proteinei.

Metoda Roberts - Stolnikov.

Determinarea proteinei 3% SSC.

Metoda Biuret de determinare a proteinei (THU).

Valoarea diagnosticului indicatorilor de cercetare.

Studentul ar trebui să poată:

Pregătiți un loc de muncă pentru testarea urinei.

Pregătiți reactivi, vase și echipamente pentru studiu.

Pentru a determina proprietățile chimice ale urinei (proteine ​​în urină prin metode calitative și cantitative).

Lucrul cu produse goale (proiectarea formelor de analiză).

Interpretați corect rezultatele studiului.

Mijloace de realizare a obiectivului:

1. Lucrul cu note, literatură educațională și specială.

2. Pregătirea pentru exerciții practice folosind recomandările metodologice ale profesorului, implementarea și executarea lucrărilor practice.

3. Lucrul cu mijloacele informaționale de educație pe suport electronic și pe hârtie.

Echipamente pentru stații de lucru și birouri:

numărul de studenți;

locul de muncă al profesorului;

mobilier specializat și echipamente.

Instrumente de instruire tehnică:

calculatoare pentru dotarea locului de muncă al profesorilor și studenților;

Dispozitive tehnice pentru afișarea informațiilor în format audiovizual;

suporturi didactice audiovizuale (prezentare, video de formare).

Rezultatul stăpânirii lecției este:

Formarea competențelor profesionale practice și a experienței practice inițiale, inclusiv competențe profesionale (PC) și generale (QA):

PC 1.1. Pregătiți un loc de muncă pentru studii clinice de laborator.

PC 1.2. Să efectueze studii clinice de laborator ale materialelor biologice.

PC 1.3. Înregistrați rezultatele cercetării.

PC 1.4. Aruncați materialele folosite, dezinfectați și sterilizați obiectele de sticlă folosite în laborator, uneltele și echipamentul de protecție.

OK 1. Înțelegeți natura și semnificația socială a profesiei lor viitoare, arată un interes constant în aceasta.

OK 2. Organizați-vă propriile activități, alegeți metode și metode standard de a efectua sarcini profesionale, evaluați eficacitatea și calitatea acestora.

OK 6. Lucrați într-o echipă și o echipă, comunicați eficient cu colegii, conducerea, pacienții.

OK 9. Să se ghideze în condițiile schimbării tehnologiei în activitatea profesională.

OK 13. Organizarea unui loc de muncă în conformitate cu cerințele protecției muncii, igienei industriale, siguranței infecțioase și a incendiilor.

Modul I. Partea teoretică cu elementele muncii independente

Numărul sarcinii 1. Studiază și conturează materialele de studiu din registrele de lucru.

O persoană sănătoasă conține de obicei mai puțin de 0,002 g / l și rar până la 0,012 g / l de proteine ​​și, de obicei, acest conținut de proteine ​​din urină este denumit "sub formă de urme" și nu este detectat prin metode chimice convenționale în urină sănătoasă umană.

Conținutul de proteine ​​în porții de urină colectate în momente diferite ale zilei poate varia considerabil.

Proteina din urină se numește proteinurie.

În funcție de pierderea zilnică de proteine, se disting următoarele grade de proteinurie: moderate - până la 1 g; mediu - de la 1 la 3 g; pronunțată - mai mult de 3 g.

Există două tipuri principale de proteinurie:

Proteinuria, cauzată de afecțiuni ale tractului urinar;

proteinuriei, cu leziuni (boli) ale rinichilor.

Proteinuria asociată cu procesele inflamatorii ale tractului urinar, însoțită de apariția în urină a unui număr semnificativ de leucocite sau eritrocite, care, totuși, nu elimină intrarea simultană a proteinelor în urină din parenchimul renal; conținutul de proteine ​​rareori depășește 1 g / l.

Proteinuria renală în majoritatea cazurilor este asociată cu o permeabilitate crescută a glomerulilor și este împărțită în două grupe:

Pentru proteinuria fiziologică se includ cazurile de apariție temporară a proteinelor în urină, care nu sunt asociate cu boli:

după consumarea unei cantități mari de alimente bogate în proteine ​​nedenaturate (carne crudă, ouă crude);

cu efort intens muscular (drumeții lungi, evenimente sportive);

atunci când luați o baie rece sau duș;

cu experiențe emoționale puternice;

cu convulsii epileptice.

Distingem proteinurie ortostatică sau tinerească, care apare la copii și adolescenți și care trece cu vârsta. În relația diferențial-diagnostic, este de o importanță practică faptul că albuminuria ortostatică se găsește adesea în perioada de recuperare a glomerulonefritei acute.

Proteu- riria renală patologică poate fi rezultatul bolilor organice ale rinichilor și ale altor organe și sisteme: glomerulonefrita acută; glomerulonefrita cronică; pielonefrită acută; cronică pielonefrită; nefropatia femeilor gravide; diverse boli asociate febrei; insuficiență cardiacă cronică severă și boală ușoară a rinichilor; lipofiză nefroză; tuberculoza rinichilor; febra hemoragică; hemoragie vasculită; anemie severă; hipertensiune, etc.

Numărul sarcinii 2. Rescrieți și trageți diagrame ale metodelor de laborator pentru determinarea proteinelor în urină.

Metode de laborator pentru determinarea proteinelor în urină

Există metode calitative și cantitative pentru determinarea proteinelor în urină, ele se bazează pe coagularea proteinelor în volumul de urină sau la limita mediilor (urină și acid); măsurarea gradului de coagulare face ca eșantionul să fie cantitativ.

proba cu 20% acid sulfosalicilic (standardizat);

Test Geller inel (în prezent nu este folosit);

detectarea proteinelor utilizând hârtie indicator (benzi) și benzi de testare.

metoda unică Brandberg-Roberts-Stolnikov;

cu acid sulfosalicilic 3%.

Metode calitative pentru determinarea proteinelor în urină

Numărul sarcinii 3. Determinarea proteinei în urină utilizând o probă standardizată cu 20% acid sulfosalicilic

Principiul metodei: se bazează pe coagularea proteinei în volumul de urină sau pe marginea mediului (urină și acid)

Vase, echipamente și reactivi:

20% acid sulfosalicilic (acid 2-hidroxi-5-sulfobenzoic ₇ H ₅ 0 ₆ S).

3 ml urină filtrată

2 bucăți teste chimice

Trei tuburi de urină filtrată sunt introduse în două tuburi, 6-8 picături de acid sulfosalicilic sunt adăugate la una dintre ele (cu experiență). Pe fundalul întunecat, ambele tuburi sunt comparate.

Interpretarea rezultatelor:

Opacificarea în eprubeta indică prezența proteinei în urină - eșantionul este pozitiv.

Notă. Urina alcalină este acidificată înainte de testare prin adăugarea a câteva picături de soluție de acid acetic 10%.

Numărul sarcinii 4. Determinarea proteinei folosind testul inelului Geller

Principiul metodei: Proba inelară se bazează pe faptul că atunci când acidul azotic este adăugat la urină la interfață (acid - urină) în prezența proteinei, coagulează și apare un inel alb.

Vase, echipamente și reactivi:

- reactivi: soluție 30% de acid azotic (HNO 3) (d = 1,2) sau reactiv Laryonic: 20-30 g clorură de sodiu (NaCl) dizolvată în 100 ml de apă distilată când se încălzește, se răcește, se filtrează; 1 ml de HNO3 concentrat se adaugă la 99 ml de filtrat.

În tubul se toarnă 1 - 2 ml dintr-o soluție 30% de HNO 3 sau reactivul Larionova și se usucă ușor pe perete aceeași cantitate de urină filtrată.

Interpretarea rezultatelor:

Apariția la limita a două lichide între 2 și 3 minute ale unui inel alb subțire indică prezența proteinei în urină.

Desenați o schemă pentru determinarea proteinei

Protein de cuantificare

Principiul metodei: Proba inelului Geller se bazează pe faptul că atunci când acidul azotic este adăugat la urină la interfață (acid - urină) în prezența proteinei, acesta coagulează și apare un inel alb.

Vase, echipamente și reactivi:

Lichid biologic (urină);

În tubul se toarnă 1 - 2 ml dintr-o soluție 30% de HNO 3 sau reactivul Larionova și se usucă ușor pe perete aceeași cantitate de urină filtrată.

Interpretarea rezultatelor:

Apariția la limita a două lichide între 2 și 3 minute
un inel alb subțire indică prezența proteinei la o concentrație de aproximativ 0,033 g / l. Dacă un inel apare mai devreme de 2 minute după laminare, urina trebuie diluată cu apă distilată și retestată cu urină diluată. Gradul de diluare a urinei este ales în funcție de tipul inelului, de lățimea acestuia, de compactitatea și de timpul de apariție.

Cu un inel asemănător firului, care a apărut mai devreme de 2 minute, urina este diluată de 2 ori, cu o lățime - de 4 ori, cu un compact - de 8 ori, etc. Concentrația proteinei se calculează prin înmulțirea diluției cu 0,033 g / l.

Un inel alb se poate forma atunci când există un număr mare de uree; spre deosebire de proteine, apare puțin peste limita a două lichide și se dizolvă atunci când este ușor încălzit.

Numărul sarcinii 6. Determinarea cantității de proteine ​​din urină cu 3% acid sulfosalicilic

Principiul metodei: Concentrația de proteine ​​în urină este proporțională cu turbiditatea care apare atunci când coagulează acidul sulfosalicilic

Vase, echipamente și reactivi:

Soluție de clorură de sodiu 0,9%;

Soluție 1% albumină standard - 1 g de albumină liofilizată (din ser uman sau bovin) se dizolvă într-o cantitate mică de soluție de NaCl 0,9% într-un balon cu o capacitate de 100 ml și apoi se completează până la semn cu același solvent. Reactivul este stabilizat prin adăugarea a 1 ml de soluție de azidă de sodiu 5% (NaN3). Când este păstrat în frigider, reactivul este stabil pentru 2 luni.

Se introduc 1,25 ml de urină filtrată într-un tub de testare, se adaugă 3,75 ml dintr-o soluție de acid sulfosalicilic 3% și se amestecă. După 5 minute, eșantionul este fotometrat pe un PEC la o lungime de undă de 590-650 nm (filtru de lumină portocalie sau roșie) împotriva controlului într-o cuvă cu o lungime a căii optice de 5 mm. Controlul servește ca o probă în care se adaugă 3,75 ml dintr-o soluție de clorură de sodiu 0,9% la 1,25 ml de urină. Concentrația proteinei este calculată conform unui grafic de calibrare, pentru construcția căruia se prepară diluții ale unei soluții standard de albumină. (vezi tabelul). Din fiecare soluție diluată obținută, se prelevează 1,25 ml și se tratează ca probe experimentale.

Pregătirea diluțiilor pentru plotarea calibrării

Soluție standard, ml

0,9% soluție de clorură de sodiu, ml

Concentrația de proteine, g / l

S-a menținut dependența rectilinie a mărimii extincției și a concentrației de proteine ​​până la 1 g / l. La concentrații mai ridicate de proteine, eșantionul trebuie diluat și trebuie luat în considerare diluția în calcul.

Dacă există substanțe care conțin iod în urină, se pot obține rezultate false pozitive. Prin urmare, testul nu poate fi utilizat la pacienții care iau preparate de iod sau care au făcut obiectul unei cercetări care utilizează compuși radiopați cu conținut de iod. Reacțiile false pozitive în timpul studiului pot fi cauzate de administrarea de medicamente sulfanilamidă, de doze mari de penicilină și de concentrații mari în urina acidului uric.

Desenați o schemă pentru determinarea proteinei

Numărul sarcinii 7. Detectarea lui Bens-Jones în urină

Principiul metodei: bazat pe termoprecipitarea reacției

Vase, echipamente și reactivi:

Reactiv: Tampon acetat 2M pH 4,9.

4 ml urină filtrată se amestecă cu 1 ml de soluție tampon și se încălzesc timp de 15 minute într-o baie de apă la 56 ° C.

Interpretarea rezultatelor:

În prezența proteinei Bens-Jones în urină, apare un sediment pronunțat în primele 2 minute.

Când concentrația proteinei este mai mică de 3 g / l, proba poate fi negativă, ceea ce este destul de rar, deoarece de obicei concentrația de proteină Bens-Jones în urină este foarte semnificativă.

Detectarea cea mai fiabilă a proteinei Bens-Jones este prin precipitare la o temperatură de 40-60 ° C. Cu toate acestea, în urină prea acidă (pH mai mică de 3,0) sau prea alcalină (pH mai mare de 6,5), cu densitate relativă mică a urinei și concentrație scăzută de bej Bens-Jones (sub 3 g / l), nu este posibilă sedimentarea.

Desenați o schemă pentru determinarea proteinei

Modul II. Lucrul independent cu etapa de cercetare

Numărul sarcinii 1. Studiați și descrieți aplicația №1 "Detectarea proteinei folosind benzi de diagnosticare"

- Obțineți eșantioane de lichid biologic (urină) de la profesor, numărați eșantioanele;

- Efectuați un test de urină folosind benzi de diagnosticare;

- Evaluați rezultatul (normă, patologie). Să presupunem cauza proteinelor în urină.

- Scrieți rezultatul în formularele de analiză, transmiteți-le profesorului.

"Detectarea proteinei folosind benzi de diagnostic"

Principiul. Proteina modifică culoarea indicatorului aplicat benzii. Indicatoarele sunt ambalate într-un set de 100 de benzi, care sunt depozitate într-o cutie de creion bine închisă, într-un loc răcoros și uscat.

Reguli pentru lucrul cu benzi de diagnosticare

Când lucrați cu benzi de diagnosticare, trebuie să respectați următoarele reguli:

- să păstreze benzile de testare pentru diagnosticare în ambalaje închise etanș;

- pentru depozitarea cazurilor într-un loc întunecos, uscat și rece la o temperatură care să nu depășească 30 ° C, dar nu în frigider;

- Nu expuneți benzile la umezeală și la lumina directă a soarelui, la temperaturi ridicate și la substanțe chimice volatile;

- obțineți doar numărul strict necesar de benzi și apoi închideți imediat cazul;

- Nu atingeți zonele de diagnosticare cu degetele.

Reguli de testare

1. Pentru studiu, utilizați urina de dimineață colectată într-un recipient de urină de plastic de unică folosință (sau feluri de mâncare uscate). Se amestecă urina livrată, dar nu se centrifughează.

Atunci când se utilizează ambalaje adaptate nestandard, reziduurile de detergent din recipientul de colectare a urinei provoacă rezultate false.

2. Din carcasa creionului, luați o bandă de testare.

3. Închideți imediat carcasa cu capacul din fabrică, protejați-l de umiditate.

4. Coborâți benzile indicatorului de hârtie timp de 2-3 secunde în urină examinată și scoateți-le imediat.

5. Pentru a îndepărta excesul de umiditate din zonele de diagnosticare ale benzii, rulați-o cu o margine lungă de-a lungul marginii recipientului (sau a altui container în care este livrată urina) sau atașați această margine a benzii pentru a filtra hârtia.

Este imposibil să spălați excesul de urină din zonele de diagnosticare.

6. După expirarea timpului specificat pe eticheta recipientului sau în instrucțiunile pentru fiecare test, comparați culoarea zonei de diagnosticare corespunzătoare cu scala de culori de pe eticheta recipientului cu dungi (standard). Procedura de testare este prezentată în Figurile 1-7.

7. Reacția este evaluată ca pozitivă sau negativă. Sau exprimată numeric în g / l. (vezi desenul nr. 8).