INSTRUCȚIUNI

privind utilizarea unui kit de reactivi pentru determinarea colorimetrică a proteinelor în urină și lichidul cefalorahidian cu roșu pirogolol

Kitul include:

200 ml (2 x 100 ml calibrator P + 2 x 2 ml)

500 ml (2 x 250 ml calibrator P + 2 x 5 ml)

Principiul metodei

Când proteinele interacționează cu roșu și pirogalol roșu

molybdate de sodiu formează un complex colorat,

a cărui intensitate a culorii este proporțională cu concentrația

Kitul conținutului

Reactiv (P) - soluție roșie de pirogalol în succinat

tampon gata de utilizare.

Calibratori - Soluții de proteine ​​de calibrare scăzută (0,20

g / l, utilizat pentru a determina microproteinuria) și înaltă

(0,50 g / l, utilizat pentru determinarea proteinuriei)

proteina conținând 70% albumină și 30%

globulină gata de utilizare.

Set de depozitare - la o temperatură de 2-8 ° C într-un ambalaj

producător pentru întreaga perioadă de valabilitate.

Stabilitatea reactivului și a calibratorilor

După deschidere, reactivul este stabil timp de 6 luni, calibratori - 3 luni. când sunt depozitate în formă închisă la o temperatură de 2-8 ° C într-un loc întunecat.

Valori normale

• urină - până la 0,120 g / l (până la 0,141 g / zi);
• (LCR) - 0,150-0,450 g / l.

Probele pentru analiză

Urină, CSF ne-hemolizat.

Pregătirea pentru analiză

1. CSF și urină centrifugate timp de 10 minute la 2700-4000 rpm.
2. Utilizați tuburi curate și bine spălate pentru analiză. Testul pentru adecvarea eprubetelor pentru analiză este absența unei modificări de culoare a reactivului. Dacă reactivul devine albastru fără adăugarea unei probe, rezultatele determinării proteinei vor fi supraestimate; prin urmare, eliberați întâi reactivul și apoi adăugați urină.
3. La stabilirea metodei, se vor folosi noi cuve, deoarece nu sunt colorate cu reactivul și proba de reacție. Cuvele de plastic vechi (tulbure, nu transparente) nu sunt potrivite pentru măsurare. Înainte de utilizare, tratați cuvele care se utilizează după cum urmează: lăsați timp de 10 minute în soluție de spălare (200 ml de soluție de peroxid de hidrogen 5% sau 1 ml de detergent), apoi clătiți cu apă de la robinet și apă distilată de cel puțin 10 ori. Kitul este potrivit pentru analize pe analizoare biochimice semiautomate și automate.

Analiza Lungime de undă: 598 (578-620) nm; lungimea căii optice: 10 mm; temperatura: 18-25 ° C.

Reactivul și calibratorul trebuie ținute la temperatura camerei timp de aproximativ 30 de minute înainte de analiză.

Procedura 1 (determinarea proteinuriei)

Probele de amestecat se păstrează timp de 10 minute la temperatura camerei (18-25 ° C). Se măsoară densitatea optică a eșantioanelor experimentale (E) și etalonare (EC) față de proba de control (martor). Culoarea este stabilă timp de 1 oră.

CE MĂSUREM ÎN METODA SURFOSALICILĂ URINĂ?

În țara noastră, o metodă turbidimetrică care utilizează un acid sulfosalicilic (metoda sulfosalicilică), care a fost inițial propusă de Kingsbury F, este folosită în principal pentru a determina concentrația proteinei în urină. B. și co-autori în 1926. În același timp, laboratoarele țărilor dezvoltate practic nu utilizează această metodă, astfel că controlul calității în laborator a analizei proteinelor urinare arată o scădere a coeficientului de variație. Astfel, în 1993, 60% din laboratoarele franceze de diagnostic clinic au efectuat determinarea concentrației proteinei urinare utilizând o metodă colorimetrică utilizând colorant roșu de pirogolol (metoda pirogalol) și numai 10% utilizând metoda sulfosalicilică. Seturile de diagnosticare pentru determinarea proteinei urinare pe baza metodei pirogalol sunt produse de firme cunoscute precum Bayer D iagnostics, Beckman, Biodirect, Biocon Diagnostik, Bio-Rad Laboratories, Eurodiag, Kone, Merck, Randox, Serono, Sentinel CH, Sigma. Din păcate, în țara noastră, din motive economice și parțial din cauza lipsei de experiență, metodele colorimetrice pentru determinarea proteinei urinare sunt încă foarte puțin utilizate.

Se pune întrebarea - cât de justificată este refuzul laboratoarelor din țările dezvoltate de a folosi metoda simplă și, cel mai important, ieftină. Pentru a clarifica această problemă, am comparat rezultatele determinării concentrației proteinei în urină a pacienților prin două metode: sulfosalicilic [1] și pirogalol [2].

Procedura de măsurare a concentrației de proteine ​​prin fiecare metodă a fost după cum urmează.

Reactivi: 3% soluție de acid sulfosalicilic, soluție de clorură de sodiu 0,9%

Calibrator (soluție de calibrare a albuminei serice, 50 g / l, în soluție de clorură de sodiu, 0,9% și azidă de sodiu, 0,095%) din kitul "Uni-Test - Total Protein" fabricat de "Diakon DS" Despre Unimed ".

Echipament: spectrofotometru SF-2000 produs de OKB "Spectr".

Curs de măsurare: 0,5 ml urină filtrată și 1,5 ml soluție 3% de acid sulfosalicilic au fost adăugate într-o cuvă de cuarț cu lungimea căii optice de 1 cm și agitate. După 10 minute, densitatea optică a fost măsurată pe un spectrofotometru la o lungime de undă de 595 nm față de o probă martor (cuvă cu 0,5 ml urină și 1,5 ml soluție de clorură de sodiu 0,9%). Calculul concentrației proteinei a fost efectuat în conformitate cu programul de calibrare. Pentru construcția sa, diluțiile unei soluții standard de albumină serică umană în soluție de clorură de sodiu 0,9% cu concentrații de 0,025; 0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9 g / l. Pentru fiecare dintre soluțiile preparate, măsurarea a fost efectuată în același mod ca și cu o probă de urină. Graficul de calibrare este prezentat în Fig.1.

Fig. 1. Curba de calibrare pentru determinarea proteinei în urină prin metoda sulfosalicilică.

A fost utilizat un kit comercial fabricat de Biocon Diagnostik (Germania) - Fluitest USP - Protein, o metodă ultra-sensibilă bazată pe complexul roșu de pirogalol-molibdat.

Reactivi: roșu pirogolol, 0,06 mmol / l, molibdat de sodiu, 0,04 mmol / l, tampon succinat 50 mmol / l, pH 2,5, detergenți 2%; Calibrator (soluție de calibrare a albuminei serice, 50 g / l, în soluție de clorură de sodiu, 0,9% și azidă de sodiu, 0,095%) din kitul "Uni-Test - Total Protein" fabricat de "Diakon DS" Despre Unimed ". [3].

Echipament: fotometru biochimic StatFax 1904 Plus ("Awareness Technology inc.", SUA).

Curba de calibrare pentru metoda descrisă cu raportul dintre proba / reactiv - 1 / 12,5 a fost obținută utilizând soluții special preparate de albumină serică: 0,05; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0 g / l prin diluarea calibratorului (50 g / l) cu soluție de clorură de sodiu 0,9% (fig.2).

Figura 2. Curba de calibrare pentru metoda roșie a pirogallolului, reactiv Fluitest USP, Biocon Diagnostik (Germania) cu un raport de probă / reactiv de 1 / 12,5.

80 μl au fost prelevate din fiecare soluție proteică și amestecate cu 1,0 ml reactiv; măsurate ca probe de urină.

Fig. 3. O diagramă a comparabilității rezultatelor măsurării conținutului de proteine ​​în probele de urină prin metode sulfosalicilice și pirogalol.

Curba de etalonare pentru reactivul produs de Unimed A / O și Biocon Diagnostik, cu un raport probă / reactiv de 1/30, a fost obținută utilizând soluții special preparate de albumină serică: 0,05; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0, 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1.7; 1,75; 1.8; 1,85; 1.9; 2,0 g / l prin diluarea calibratorului (50 g / l) cu soluție de clorură de sodiu 0,9% (Fig.4).

Fig. 4. Curbele de calibrare pentru reactivul Unimed A / O (graficul superior) și kitul Fluitest USP de la Biocon Diagnostik (grafic inferior) cu un raport probă / reactiv de 1/30.

50 pl au fost extrase din fiecare soluție proteică și amestecate cu 1,5 ml de reactiv și măsurate ca probe de urină.

În cadrul studiului, pentru a atinge sensibilitatea maximă a metodei pirogalol, s-a utilizat varianta extrem de sensibilă modificată. Pentru aceasta, volumul de urină adăugat a crescut. Curs de măsurare: 1 ml din principalul reactiv s-a adăugat la toate eprubetele, apoi 80 pl de apă distilată (martor) s-au adăugat la primul tub, au fost adăugate 80 pl urină centrifugată, incubate la temperatura camerei timp de 10 minute și densitatea optică a probei a fost măsurată față de semifabricatul Lungime de undă 600 nm și filtru diferențial de 650 nm

Pentru a compara metodele de determinare a concentrației de proteine ​​în urină, s-au măsurat 60 de mostre ale urinei pacienților prin metode sulfosalicilice și pirogalol.

Sensibilitatea metodelor de măsurare a proteinei în urină a fost evaluată prin examinarea soluțiilor apoase preparate din urină care conțin concentrații scăzute de albumină serică (de la 0 la 0,05 g / l). Pentru metodele de pirogalol și sulfosalicil, am investigat, de asemenea, valorile absorbției nespecifice datorită culorii probei de urină. Pentru aceasta s-a măsurat densitatea optică a probelor de urină, în care, în loc de acid sulfosalicilic sau reactiv pirogalol, s-a adăugat o cantitate echivalentă de soluție salină.

Pentru a evalua efectul matricei (urinei) asupra rezultatelor metodei sulfosalicilice, s-au efectuat următoarele experimente.

1) În probele de urină care nu conțin proteine, în conformitate cu metodele de pirogalol și sulfosalicil (n = 43), s-a adăugat albumină serică umană la o concentrație finală de 0,4 g / l. Apoi, folosind metodele de mai sus, a fost determinată concentrația proteinei în probele preparate.

2) Probele de urină (n = 16), având o proteină conform metodei pirogalol, au fost diluate de două ori cu o soluție de clorură de sodiu 0,9%. Probele obținute au fost reexaminate prin metoda sulfosalicilică, concentrația proteinei a fost recalculată pentru diluare.

Rezultatele cercetării și discuțiile

Un studiu al probelor de urină care conține concentrații specifice de albumină a arătat că concentrația minimă detectabilă a albuminei (sensibilitate la metodă) a fost de 0,033 g / l pentru metoda sulfosalicilică și 0,012 g / l pentru metoda pirogalolului.

Rezultatele măsurătorilor sub forma unei diagrame de comparabilitate a rezultatelor măsurării conținutului de proteine ​​în probele de urină prin metodele sulfosalicilice (axa coordonată) și pirogalol (axa abscisa) sunt prezentate în figura 3. Linia oblică solidă din grafic corespunde egalității rezultatelor măsurătorilor prin două metode. Dacă ambele metode au dat valori similare, atunci punctele de pe grafic ar trebui grupate în apropierea liniei pline. Datele prezentate în Fig. 3, putem de asemenea să remarcăm că metoda sulfosalicilică a arătat constant concentrații scăzute de proteine ​​în toate probele de urină comparativ cu metoda pirogalolului.

După cum a arătat studiul, între rezultatele obținute prin utilizarea metodelor sulfosalicilice și pirogalol, nu există o conexiune statistică convingătoare. În plus, în comparație cu metoda pirogalolului, metoda sulfosalicilică în 95% din probele de urină a arătat valori mai scăzute ale concentrației de proteine. În același timp, în 86% din cazuri, măsurarea prin metoda sulfosalicilică a dat rezultate subestimate de două sau mai multe ori comparativ cu metoda pirogalolului.

În același timp, metoda sulfosalicilică a prezentat în unele cazuri prezența proteinei în probă datorită culorii întunecate sau turbidității crescute a urinei studiate. Sa constatat că, la determinarea proteinei prin metoda sulfosalicilică (raportul probei / reactivului = 1/3) la o lungime de undă de 595 nm, contribuția probei de urină datorată culorii sau turbidității sale la rezultat poate fi de la 0 la 0,247 g / l (valoare medie - 0,031 g / l). Astfel, trebuie recunoscut faptul că atunci când se utilizează metoda sulfosalicilică, este obligatorie utilizarea unei probe de control (eșantion de urină + soluție salină) pentru fiecare probă de urină. La determinarea proteinei prin metoda pirogalol, culoarea sau gradul de turbiditate al probei de urină nu a afectat rezultatul.

Experimentul privind evaluarea efectului matricei (urină) a arătat că în aproape toate probele de urină preparate care conțin 0,4 g / l albumină, concentrația sa determinată prin metoda sulfo-salicilică a fost sub medie de 0,4 g / l cu 20% (valori limită concentrația de proteine ​​0,29-0,34 g / l). În același timp, la măsurarea concentrației proteinei din aceste probe prin metoda pirogalol, rezultatele pentru toate probele au fost în intervalul 0,40-0,46 g / l. De asemenea, la evaluarea efectului matricei (urinei) asupra rezultatelor măsurării concentrației proteinei prin metoda sulfosalicilică, sa constatat că în 5 din 16 probe de urină diluate dublu concentrația proteinei a fost cu 15-33% mai mare decât în ​​probele corespunzătoare ne-diluate. Pentru elucidarea finală a efectului matricei asupra rezultatelor metodei sulfosalicilice, este necesară cercetarea unui număr mare de probe de urină.

Astfel, datele obținute indică avantajele metodei pirogalol asupra metodei sulfosalicilice datorită sensibilității sale ridicate și a non-susceptibilității la factorii de interferență, nu este necesară o probă de urină neuniformă, posibilitatea utilizării unui standard pentru construirea unei curbe de calibrare și o cantitate mică de urină pentru analiză. Prezența unor astfel de caracteristici ne permite să recomandăm utilizarea metodei pirogalol pentru utilizarea pe scară largă în practica de laborator.

Din datele obținute rezultă o concluzie: rezultatele măsurării concentrației de proteine ​​în urină prin metoda sulfosalicilică nu sunt comparabile cu rezultatele obținute prin metoda pirogalolului. Acest fapt este răspunsul la întrebarea - de ce laboratoarele țărilor dezvoltate nu utilizează metoda sulfosalicilică. Aplicarea acestei metode în țările subdezvoltate, aparent, se explică prin faptul că factorul de preț prevalează asupra preciziei și semnificației diagnostice a rezultatelor obținute și, având în vedere cifrele prezentate în fig. 3 rezultate, se poate spune, și peste bunul simț. Cine are nevoie de o astfel de analiză, când la o concentrație de proteină în urină de 0,3 g / l, rezultatul măsurătorii poate fi de la 0,05 la 0,25 g / l? În ceea ce privește factorul de preț, atunci, după cum știți, mizerabilul plătește de două ori. Rezultatele eronate ale analizei conduc la un diagnostic eronat și la un tratament ineficient al pacientului. Principalul pericol al utilizării metodei sulfosalicilice este faptul că obținem valori semnificativ subestimate și rareori lipsește proteinuria. Prin urmare, această metodă nu poate fi aplicată nici măcar pentru screening.

Deci, ce măsuram prin metoda sulfosalicilică? Metoda aparține clasei turbidimetrice, bazată pe măsurarea schimbării transmisiei de lumină (D D) a amestecului de reacție din cauza dispersiei luminii (turbiditate). În cazul detectării proteinei în urină, se formează turbiditate datorită următorului proces: moleculele de proteine ​​urinare într-un mediu acid sunt denaturate, trecând de la o formă globulară compactă într-o formă "filamentoasă". În același timp, capacitatea de formare a conglomerate crește brusc (reacția de precipitare) în proteine. Moleculele individuale de proteine ​​sunt mai mici decât lungimea de undă a luminii vizibile și, prin urmare, o împrăștie foarte slab. Eficacitatea de dispersie crește dramatic atunci când dimensiunea conglomeratelor de molecule de proteine ​​rezultate se apropie de valoarea de 0,6 μm (lungimea de undă a luminii de sondare). Cu cât concentrația de proteine ​​este mai mare în urină, cu atât este mai mare numărul de astfel de conglomerate (centre de dispersie). Cu toate acestea, relația dintre densitatea optică D D măsurată pe un fotometru și concentrația de proteine ​​în urină este foarte complexă. În stadiul inițial al reacției, se formează o anumită cantitate de particule de proteine ​​mici, apoi se înțepenează împreună în particule mai mari, în timp ce concentrația centrelor de dispersie scade, iar eficiența (secțiunea transversală) a dispersiei fiecărui centru crește. În orice moment, avem în amestecul de reacție un anumit număr de centre de împrăștiere cu dimensiuni diferite. La concentrații mari de proteine ​​în urină pot forma particule de proteine ​​mari care precipită, ceea ce duce la o scădere a densității optice a amestecului de reacție.

Procesul de denaturare a proteinelor și reacția precipitării depind de compoziția mediului în care apar (pH-ul, concentrația diferitelor săruri). Pentru a calibra metoda, folosim o soluție apoasă de albumină umană cu adaos de clorură de sodiu 0,9%. Când măsuram concentrația de proteine ​​în urină, nu știm și nu luăm în considerare nici pH-ul urinei, nici compoziția sării. De asemenea, nu luăm în considerare faptul că diferite proteine ​​reacționează diferit în soluția de acid sulfosalicilic. Aceasta explică scatterul mare al rezultatelor măsurătorilor prezentate în Fig. 3. Cu cât compoziția urinei este mai apropiată de compoziția calibratorului, cu atât este mai precis rezultatul măsurării. Cu toate acestea, există foarte puține astfel de mostre de urină. În majoritatea cazurilor, compoziția urinei este de așa natură încât rezultatele măsurătorilor sunt subestimate și adesea destul de semnificative.

Acesta din urmă este confirmat de experimentul descris mai sus, în care concentrația proteinei a fost măsurată prin metoda sulfosalicilică în probe de urină nediluate și dublate. Comparația datelor obținute a arătat că diluția urinei (luând în considerare gradul de diluție) conduce la o creștere a rezultatelor măsurătorilor concentrației proteice cu 15-33%. Acest fapt confirmă influența semnificativă a compoziției urinei asupra rezultatului determinării concentrației proteinei (efect matriceal).

De ce metoda pirogallol permite obținerea unor rezultate mai precise ale măsurării concentrației de proteine ​​în urină? În primul rând, datorită multiplei diluări a probelor de urină din amestecul de reacție. Dacă în metoda sulfosalicilică raportul dintre proba de urină / reactiv este de 1/3, atunci în metoda pirogalol poate fi în intervalul de la 1/12,5 până la 1/60, în funcție de varianta tehnicii, ceea ce reduce semnificativ efectul compoziției de urină asupra rezultatului măsurătorii. În al doilea rând, reacția are loc în tampon succinat, adică la un pH stabil. În sfârșit, însăși principiul metodei, dacă se poate spune, este mai transparent. Molibdatul de sodiu și colorantul roșu de pirogolol formează un complex cu o moleculă de proteine. Aceasta conduce la faptul că moleculele de coloranți, într-o stare liberă, nu absoarbă lumina la o lungime de undă de 600 nm, în combinație cu o proteină, absorb lumina. Astfel, se pare că fiecare moleculă de proteină este marcată cu un colorant și, ca rezultat, constatăm că modificarea densității optice a amestecului de reacție la o lungime de undă de 600 nm este în mod unic legată de concentrația proteică din urină.

Ca o concluzie, diferențele cele mai semnificative dintre metoda sulfosalicilică pentru determinarea proteinei în urină și metoda folosind colorantul roșu de pirogolol sunt prezentate în tabelul nr. 1.

Tab. Nr. 1. Caracteristicile comparative ale două metode de determinare a proteinei în urină (metode sulfosalicilice și pirogalol)

Determinarea proteinei urinare cu roșu pirogalol

Principiul metodei se bazează pe măsurarea fotometrică a densității optice a soluției dintr-un complex colorat format prin interacțiunea moleculelor de proteine ​​cu molecule ale complexului de colorare roșie a pirogololului și molibdat de sodiu (complex Pyrogallol roșu-molibdat) într-un mediu acid. Intensitatea culorii soluției este proporțională cu conținutul de proteine ​​din materialul studiat. Prezența detergenților în reactiv oferă o definiție echivalentă a proteinelor de natură și structură diferite.

Reactivi. 1) soluție de pirogalol roșu (PGA) de 1,5 mmol / l: 60 mg de PGA sunt dizolvate în 100 ml de metanol. Depozitați la o temperatură de 0-5 ° С; 2) soluție tampon succinat 50 mmol / l pH 2,5: 5,9 g acid succinic (HOOC-CH₂CH₂-COOH); 0,14 g de oxalat de sodiu (Na₂C₂O₄) și 0,5 g de benzoat de sodiu (C.₆H₅COONa) se dizolvă în 900 ml de apă distilată; 3) soluție 10 mmol / l de clorhidrat de clorură de sodiu (Na₂MoO₄ X 2H₂O): 240 mg de molibdat de sodiu se dizolvă în 100 ml de apă distilată; 4) Reactiv de lucru: la 900 ml soluție tampon succinat se adaugă 40 ml soluție de PHC și 4 ml soluție de molibdat de sodiu. PH-ul soluției este ajustat la 2,5 cu o soluție de acid clorhidric 0,1 mol / l (HCl) și volumul său este ajustat la 1 l. Reactivul în această formă este gata de utilizare și este stabil când este depozitat într-un loc întunecat și la o temperatură de 2-25 ° C timp de 6 luni; 5) 0,5 g / l soluție standard de albumină.

Cursul de determinare. 0,05 ml din urina studiată este introdusă în primul tub de testare, 0,05 ml soluție standard albuminică se adaugă la cel de-al doilea tub de testare și 0,05 ml apă distilată la cel de-al treilea eprubetă (proba de control), apoi se adaugă 3 ml de reactiv de lucru la aceste eprubete. Conținutul tuburilor este amestecat și, după 10 minute, eșantionul și standardul sunt fotometrate pe o probă de control la o lungime de undă de 596 nm într-o cuvă cu o lungime de cale optică de 10 mm.

Calculul concentrației de proteine ​​din proba de urină analizată se efectuează conform formulei:

unde C este concentrația de proteină din proba de urină analizată, g / l; A_etc. și a_articol- stingerea probei de urină studiată și a soluției standard de albumină, g / l; 0,5 - concentrația soluției standard de albumină, g / l.

• culoarea soluției (complexul color) este stabilă timp de o oră;
• raportul direct proporțional între concentrația de proteine ​​din probă și absorbția soluției depinde de tipul fotometrului;
• când conținutul de proteine ​​din urină este mai mare de 3 g / l, proba este diluată cu soluție izotonică de clorură de sodiu (9 g / l) și se determină repetarea. Gradul de diluare este luat în considerare la determinarea concentrației de proteine.

Tratam ficatul

Tratament, simptome, medicamente

Determinarea roșie a pirogallolului de proteine ​​în urină

26.02.2009

Kurilyak O.A., Ph.D.

În mod normal, proteina este excretată în urină într-o cantitate relativ mică, de obicei nu mai mult de 100-150 mg pe zi.

Diureza zilnică la o persoană sănătoasă este de 1000-1500 ml / zi; astfel, concentrația proteinei în condiții fiziologice este de 8-10 mg / dl (0,08-0,1 g / l).

Proteina totală din urină este reprezentată de trei fracțiuni principale - albumină, mucoproteine ​​și globuline.

Albumina din urină este porțiunea de albumină serică care a fost filtrată în glomeruli și nu a fost reabsorbită în tubulii renale; în excreția normală a albuminei în urină este mai mică de 30 mg pe zi. O altă sursă importantă de proteine ​​în urină sunt tubulii renale, în special partea distală a tubulilor. Aceste tubule secretă două treimi din cantitatea totală de proteine ​​urinare; din această cantitate, aproximativ 50% este reprezentată de glicoproteina Tamm-Horsfall, care este secretată de epiteliul tubulelor distal și joacă un rol important în formarea pietrelor urinare. Alte proteine ​​sunt prezente în urină și într-o mică cantitate derivată din filtrată prin filtrul plasmatic renal proteine ​​cu greutate moleculară scăzută, care nu sunt reabsorbite în tubii renali, microglobulina din epiteliul renal tubular (RTE) și de prostată și lichid vaginal.

Proteinuria, adică o creștere a conținutului de proteine ​​în urină este unul dintre cele mai semnificative simptome, care reflectă afectarea rinichiului. Cu toate acestea, o serie de alte afecțiuni pot fi, de asemenea, însoțite de proteinurie. De aceea, există două grupuri principale de proteinurie: renală (adevărată) și proteinurie extrarenală (falsă).

În proteinurie renală, proteina intră în urină direct din sânge datorită creșterii permeabilității filtrului glomerular. proteinuria renale apare adesea în glomerulonefrită, nefroză, pielonefrită, nefroscleroza, amiloidoza renala, diferite forme de nefropatia, nefropatia exemplu gravidă condiții febrile, hipertensiune, etc. Proteinuria se regăsește, de asemenea, la persoanele sănătoase după efort fizic sever, hipotermie și stres psihologic. La nou-născuți în prima săptămână de viață, există o proteinurie fiziologică și astenie la copii și adolescenți, în combinație cu creșterea rapidă în vârstă 7-18 ani este posibilă proteinurie ortostatică (în poziția verticală a corpului).

În cazul proteinuriei false (extrarenale), sursa de proteine ​​în urină este un amestec de leucocite, eritrocite, celule epiteliale ale urotheliului din tractul urinar. Degradarea acestor elemente, în special pronunțată cu urină alcalină, conduce la pătrunderea proteinelor în urină, care a trecut deja filtrul renal. Nivelul deosebit de ridicat de proteinurie falsă dă sânge în urină, cu hematurie profundă, poate atinge 30 g / l și mai mult. Boli care pot fi însoțite de proteinurie extrarenală - urolitiază, tuberculoză rinichi, tumori ale tractului urinar sau renal, cistită, pielită, prostatită, uretrită, vulvovaginită.

Clasificarea clinică include o proteinurie ușoară (mai mică de 0,5 g / zi), moderată (de la 0,5 la 4 g / zi) sau severă (mai mult de 4 g / zi).

Majoritatea pacienților cu afecțiuni renale, cum ar fi glomerulonefrita acută sau pielonefrită, evidențiază proteinurie moderată, dar pacienții cu sindrom nefrotic, de obicei, elimină zilnic mai mult de 4 g de proteine ​​în urină.

Pentru a cuantifica proteina utilizată o gamă largă de metode, în special, o metodă uniformă Brandberg-Roberts-Stolnikova, metoda de testare biuret folosind acid sulfosalicilic, folosind metode de colorant albastru Coomassie, colorant roșu pirogalol și colab.

Utilizarea diferitelor metode de determinare a proteinei în urină a condus la o confuzie serioasă în interpretarea limitelor normei conținutului de proteine ​​în urină. Deoarece două metode sunt utilizate cel mai frecvent în laboratoare - cu acid sulfosalicilic și colorant roșu de pirogallol, considerăm problema corectitudinii limitelor normelor pentru acestea. Din punct de vedere al metodei sulfosalicilice în urină normală, conținutul de proteine ​​nu trebuie să depășească 0,03 g / l, iar din punctul de vedere al pirogalolului, 0,1 g / l! Diferențele sunt triple.

Valorile scăzute ale concentrației normale de proteine ​​în urină atunci când se utilizează sulfosalicilic datorită următoarelor puncte:

• curba de calibrare se bazează pe o soluție apoasă de albumină. Urina în compoziția sa este foarte diferită de apă: pH, sare, compuși cu greutate moleculară mică (creatinină, uree, etc.). Ca urmare, potrivit lui Altshuler, Rakov și Tachev, o eroare în determinarea proteinei urinare poate fi de 3 ori sau mai mult! Ie rezultatele corecte pot fi obținute numai în cazurile în care urina are o greutate specifică foarte scăzută, iar compoziția și pH-ul acesteia se apropie de apă;
• sensibilitatea mai mare a metodei sulfosalicilice la albumină în comparație cu alte proteine ​​(la acel moment, după cum sa menționat mai sus, albumina din probele de urină normală nu este mai mare de 30% din proteina totală din urină);
• dacă pH-ul urinei este deplasat pe partea alcalină, acidul sulfosalicilic este neutralizat, ceea ce determină, de asemenea, o scădere a rezultatelor determinării proteinei;
• rata de sedimentare a precipitatelor este supusă unor variații semnificative - la concentrații scăzute de proteine, precipitarea este încetinită, iar încetarea anticipată a reacției conduce la o subestimare a rezultatului;
• viteza de reacție de precipitare depinde în mod esențial de amestecarea amestecului de reacție. La concentrații mari de proteine, agitarea viguroasă a tubului poate duce la formarea fulgilor mari și la precipitarea lor rapidă.

Toate caracteristicile enumerate mai sus ale metodei conduc la o subestimare semnificativă a concentrației de proteine ​​determinată în urină. Gradul de subexportare depinde foarte mult de compoziția unei anumite probe de urină. Deoarece metoda acidului sulfosalicilic dă o valoare subestimată a concentrației de proteine, limita normală pentru această metodă este de aproximativ 0,03 g / l, de aproximativ trei ori mai mică comparativ cu datele din cărțile de referință străine privind diagnosticul clinic de laborator.

Marea majoritate a laboratoarelor din țările occidentale au abandonat utilizarea metodei sulfosalicilice pentru determinarea concentrației de proteine ​​în urină și utilizează în mod activ metoda pirogalol pentru acest scop. Metoda pirogalol pentru determinarea concentrației proteinelor în urină și alte fluide biologice se bazează pe principiul fotometric, măsurarea densității optice a complexului colorat format prin interacțiunea moleculelor proteice și colorant complex roșu de pirogalol și molibdat de sodiu (complex pirogalol Red-molibdat).

De ce metoda pirogallol permite obținerea unor rezultate mai precise ale măsurării concentrației de proteine ​​în urină? În primul rând, datorită multiplei diluări a probelor de urină din amestecul de reacție. Dacă în metoda sulfosalicilică raportul dintre proba de urină / reactiv este de 1/3, atunci în metoda pirogalol poate fi în intervalul de la 1/12,5 până la 1/60, în funcție de varianta tehnicii, ceea ce reduce semnificativ efectul compoziției de urină asupra rezultatului măsurătorii. În al doilea rând, reacția are loc în tampon succinat, adică la un pH stabil. Și, în sfârșit, se poate spune că principiul metodei este mai "transparent". Molibdatul de sodiu și colorantul roșu de pirogolol formează un complex cu o moleculă de proteine. Aceasta conduce la faptul că moleculele colorante în stare liberă care nu absorb lumina la o lungime de undă de 600 nm în combinație cu o proteină absorb lumina. Astfel, se pare că fiecare moleculă de proteină este marcată cu un colorant și, ca rezultat, vedem că modificarea densității optice a amestecului de reacție la o lungime de undă de 600 nm se corelează în mod clar cu concentrația proteinei din urină. Mai mult, deoarece afinitatea roșului pirogolol la diferite fracțiuni de proteine ​​este aproape aceeași, metoda permite determinarea proteinei totale din urină. Prin urmare, limita valorilor normale ale concentrației proteinei în urină este de 0,1 g / l (este indicată în toate orientările moderne pentru diagnosticul clinic și de laborator, inclusiv manualul clinic pentru teste de laborator, editat de N. Tits). Caracteristicile comparative ale metodelor pirogalol și sulfosalicilice pentru determinarea proteinei urinare sunt prezentate în Tabelul 1.

În concluzie, aș dori să mă concentrez încă o dată asupra faptului că atunci când laboratorul merge de la metoda sulfosalicilică pentru determinarea proteinei urinare la metoda pirogalol, limita valorilor normale crește semnificativ (de la 0,03 g / l la 0,1 g / l!). Acest personal de laborator ar trebui să notifice medicii, pentru că În această situație, diagnosticul de proteinurie se poate face numai în cazul în care conținutul de proteine ​​din urină depășește 0,1 g / l.

3. Determinarea proteinei.

Principiul metodei pe baza coagulării proteinelor în urină, în prezența acidului azotic (sau 20% soluție de sulfosalicilic).

Progresul muncii: la 5 picături de urină adăugați 1-2 picături de acid azotic (sau sulfosalicilic). În prezența de proteine ​​în urină apare turbiditate.

Tabel. Detectarea componentelor patologice ale urinei.

Notă: în prezența glucozei și a proteinei din urina examinată, se determină conținutul cantitativ.

Determinarea cantitativă a proteinei în urină prin metoda colorimetrică cu roșu pirogalol.

Principiul metodei: Atunci când proteina interacționează cu roșu pirogolol și molibdat de sodiu, se formează un complex colorat, intensitatea culorii, care este proporțională cu concentrația de proteine ​​din probă.

reactivi: Reactiv de lucru - soluție roșie de pirogolol în tampon de succinat, soluție de proteine ​​de calibrare cu o concentrație de 0,50 g / l

Probele se amestecă, menținute timp de 10 minute. la temperatura camerei (18-25 ° C). Se măsoară densitatea optică experimentată (D_op) și eșantion de calibrare (D_la) față de proba martor la λ = 598 (578-610) nm. Culoarea este stabilă timp de 1 oră.

calcul: concentrația de proteine ​​în urină (C) g / l se calculează cu formula:

Valori normale: până la 0,094 g / l, (0,141 g / zi)

Determinarea cantitativă a glucozei în urină prin metoda glucozoxidazei.

Principiul metodei: Când D-glucoza este oxidat de oxigenul atmosferic sub acțiunea oxidului de glucoză, se formează o cantitate echimolară de peroxid de hidrogen. Sub acțiunea peroxidazei, peroxidul de hidrogen oxidează substraturile cromogenice (un amestec de fenol și 4 aminoantipirină - 4AAP) cu formarea unui produs colorat. Intensitatea culorii este proporțională cu conținutul de glucoză.

2 N₂oh₂ + fenol + compus 4AAP colorat + 4H₂oh

Progresul muncii: 1 ml de soluție de lucru și 0,5 ml de tampon fosfat sunt introduse în două tuburi. În primul tub se adaugă 0,02 ml de urină și se adaugă 0,02 ml calibrator la cea de-a doua (calibrare, soluție standard de glucoză, 10 mmol / l). Probele sunt amestecate, incubate timp de 15 minute la o temperatură de 37 ° C într-un termostat, iar densitatea optică este măsurată prin metoda experimentală (D_op) și calibrarea (D_la) cu reactivul de lucru la o lungime de undă de 500-546 nm.

Conținutul de glucoză în urină zilnică este determinat cu mmol / zi prin înmulțirea rezultatului obținut prin volumul de urină colectat pe zi.

Notă. Când conținutul de zahăr din urină trebuie să fie diluat mai mult de 1%.

În prezent, laboratoarele biochimice utilizează o metodă expresă unică pentru analiza urinei pentru glucoză folosind testul de glucoză reactiv la testul de glucoză sau folosind benzi de testare combinate pentru pH, proteine, glucoză, corpuri cetone și sânge. Benzi de testare, scufundat într-un vas cu urină timp de o secundă. și comparați culoarea de pe scară.

Doctorul Hepatită

tratament hepatic

Proteină normală în metoda pirogalolului din urină

O persoană sănătoasă produce 1,0-1,5 litri de urină pe zi. Un conținut de 8-10 mg / dl de proteine ​​în acesta este un fenomen fiziologic. Consumul zilnic de proteine ​​în urină 100-150 mg nu trebuie să provoace suspiciune. Globulina, mucoproteina și albumina sunt ceea ce alcătuiesc proteina totală în urină. Un debit mare de albumină indică o încălcare a procesului de filtrare în rinichi și se numește proteinurie sau albuminurie.

Fiecare substanță din urină are o rată "sănătoasă", iar dacă indicele de proteine ​​fluctuează, aceasta poate indica o patologie a rinichilor.

Analiza de urină implică utilizarea primei porțiuni (dimineața) sau luați o mostră zilnică. Acesta din urmă este de preferat să se evalueze nivelul proteinuriei, deoarece conținutul de proteine ​​are fluctuații zilnice pronunțate. Urina din timpul zilei este colectată într-un singur recipient, măsurând volumul total. Pentru un laborator care efectuează analiza proteinelor urinare, este suficientă o probă standard (de la 50 la 100 ml) din acest recipient, cantitatea rămasă nu este necesară. Pentru mai multe informații, se efectuează un test suplimentar la Zimnitsky, care arată dacă indicatorii de urină pe zi sunt normali.

Înapoi la cuprins

Proteina din urină este normală la un adult nu trebuie să depășească 0,033 g / l. În același timp, rata zilnică nu este mai mare de 0,05 g / l. Pentru femeile însărcinate, rata de proteine ​​din urina zilnică este mai mare - 0,3 g / l. Și dimineața urina este aceeași - 0,033 g / l. Standardele de proteine ​​diferă în analiza generală a urinei și la copii: 0,036 g / l pentru partea de dimineață și 0,06 g / l pe zi. Cel mai adesea, laboratoarele efectuează o analiză utilizând două metode, care arată cât de multă fracțiune proteică este conținută în urină. Valorile normale de mai sus sunt valabile pentru analiza efectuată cu acid sulfosalicilic. Dacă s-a utilizat vopsea roșie de pirogallol, valorile vor fi de trei ori diferite.

Înapoi la cuprins

Cauza proteinei din urină poate fi procese patologice în rinichi:

• filtrarea în glomerulele renale merge în mod greșit;
• absorbția în tubulii proteici este afectată;
• Unele boli au o încărcătură puternică asupra rinichilor - când proteinele din sânge sunt ridicate, rinichii pur și simplu nu au timp să-l filtreze.

Motivele rămase sunt considerate a fi non-rinichi. Acesta este modul în care se dezvoltă albuminuria funcțională. Proteina în analiza urinei apare în reacții alergice, epilepsie, insuficiență cardiacă, leucemie, otrăvire, mielom, chimioterapie, boli sistemice. Cel mai adesea, acest indicator în analizele pacientului va fi primul clopot al bolii hipertensive.

O creștere a proteinei din urină se poate datora unor factori de natură non-patologică, prin urmare vor fi necesare analize suplimentare.

Metodele cantitative pentru determinarea proteinei în urină dau erori, prin urmare, se recomandă efectuarea mai multor analize și apoi folosirea formulei pentru a calcula valoarea corectă. Conținutul de proteine ​​din urină se măsoară în g / l sau mg / l. Acești indicatori de proteine ​​fac posibilă determinarea nivelului proteinuriei, sugerăm un motiv, evaluăm prognoza și determinăm strategia.

Înapoi la cuprins

Pentru ca funcționarea completă a corpului necesită un schimb constant între sânge și țesuturi. Este posibilă numai dacă există o anumită presiune osmotică în vasele de sânge. Proteinele plasmatice din sânge mențin doar un astfel de nivel de presiune, când substanțele moleculare mici trec ușor din mediu cu concentrația lor ridicată în mediul cu concentrația mai scăzută. Pierderea moleculelor de proteine ​​duce la eliberarea sângelui din patul său în țesut, care este plin de edeme puternice. Aceasta este manifestarea proteinuriei moderate și severe.

Etapele inițiale ale albuminuriei sunt asimptomatice. Pacientul acordă atenție doar manifestărilor bolii de bază, care este cauza proteinelor în urină.

Urmărirea proteinuriei se numește o creștere a nivelului de proteine ​​în urină datorată utilizării anumitor produse.

Urina pentru analiză este colectată într-un recipient curat, degresat. Înainte de colectarea toaletei este indicată perineul, trebuie să spălați cu săpun și apă. Femeile sunt sfătuite să închidă vaginul cu o bucată de bumbac sau un tampon, astfel încât descărcarea vaginală să nu afecteze rezultatul. În ajun, este mai bine să nu beți alcool, apă minerală, cafea, picant, sărat și alimente care dă urinei o culoare (afine, sfecla). Exercițiul fizic puternic, mersul lung, stresul, febra și transpirația, consumul excesiv de alimente sau medicamente proteice înainte de a da urină provoacă apariția proteinelor în analiza urinei unei persoane complet sănătoase. Acest fenomen admisibil se numește proteinurie trasică.

Înapoi la cuprins

Boala renala care duce la pierderea proteinei:

• Amiloidoza. Celulele normale din rinichi sunt înlocuite cu amiloide (complexul protein-zaharid), care împiedică organismul să funcționeze normal. La stadiul proteinuric, amiloidele sunt depozitate în țesuturile renale, distrugând nefronul și, ca rezultat, filtrul renal. Deci proteina devine din sânge în urină. Această etapă poate dura mai mult de 10 ani.
• Nefropatie diabetică. Datorită metabolismului inadecvat al carbohidraților și al lipidelor, vasele de sânge, glomerulii și tubulii din rinichi sunt distruse. Proteina din urină este primul semn al unei complicații prezise a diabetului zaharat.
• Boli ale genezei inflamatorii - nefrită. Cel mai adesea, leziunile afectează vasele de sânge, glomeruli și sistemul pielocaliceal, perturbând cursul normal al sistemului de filtrare.
• Glomerulonefrita, în majoritatea cazurilor, este de natură autoimună. Pacientul se plânge de o scădere a cantității de urină, de dureri de spate și de o creștere a presiunii. Pentru tratamentul glomerulonefritei, recomandă dieta, regimul și terapia medicamentoasă.
• Pielonefrită. În perioada acută se produce simptome de infecție bacteriană: frisoane, greață, cefalee. Aceasta este o boală infecțioasă.
• Boală rinichi policistă.

Într-un corp sănătos, moleculele de proteine ​​(și ele sunt destul de mari în mărime) nu sunt capabile să treacă prin sistemul de filtrare a rinichilor. Prin urmare, proteinele din urină nu ar trebui să fie. Acest indicator este același pentru bărbați și femei. Dacă analiza indică proteinurie, este important să consultați medicul pentru motive. Specialistul va estima cât de ridicată este nivelul proteic, dacă există o patologie concomitentă, cum să restabilească funcționarea normală a corpului. Potrivit statisticilor, femeile au un risc mai mare de boală urogenitală decât bărbații.

Principiul metodei pe baza coagulării proteinelor în urină, în prezența acidului azotic (sau 20% soluție de sulfosalicilic).

Progresul muncii: la 5 picături de urină adăugați 1-2 picături de acid azotic (sau sulfosalicilic). În prezența de proteine ​​în urină apare turbiditate.

Tabel. Detectarea componentelor patologice ale urinei.

Notă: în prezența glucozei și a proteinei din urina examinată, se determină conținutul cantitativ.

Principiul metodei: Atunci când proteina interacționează cu roșu pirogolol și molibdat de sodiu, se formează un complex colorat, intensitatea culorii, care este proporțională cu concentrația de proteine ​​din probă.

reactivi: Reactiv de lucru - soluție roșie de pirogolol în tampon de succinat, soluție de proteine ​​de calibrare cu o concentrație de 0,50 g / l

Probele se amestecă, menținute timp de 10 minute. la temperatura camerei (18-25 ° C). Se măsoară densitatea optică a probei experimentale (Dop) și etalonării (Dk) față de proba martor la λ = 598 (578-610) nm. Culoarea este stabilă timp de 1 oră.

calcul: concentrația de proteine ​​în urină (C) g / l se calculează cu formula:

unde: Dop = Dk = C = g / l.

Valori normale: până la 0,094 g / l, (0,141 g / zi)

Principiul metodei: Când D-glucoza este oxidat de oxigenul atmosferic sub acțiunea oxidului de glucoză, se formează o cantitate echimolară de peroxid de hidrogen. Sub acțiunea peroxidazei, peroxidul de hidrogen oxidează substraturile cromogenice (un amestec de fenol și 4 aminoantipirină - 4AAP) cu formarea unui produs colorat. Intensitatea culorii este proporțională cu conținutul de glucoză.

Glucoză + O2 + H2O gluconolactonă + H2O2

2H2O2 + fenol + compus 4AAP colorat + 4H2O

Progresul muncii: 1 ml de soluție de lucru și 0,5 ml de tampon fosfat sunt introduse în două tuburi. În primul tub se adaugă 0,02 ml de urină și se adaugă 0,02 ml calibrator la cea de-a doua (calibrare, soluție standard de glucoză, 10 mmol / l). Probele sunt amestecate, incubate timp de 15 minute la o temperatură de 37 ° C într-un termostat și densitatea optică a probelor experimentale (Dop) și de calibrare (Dk) față de reactivul de lucru este măsurată la o lungime de undă de 500-546 nm.

Calculație: C = Dop / Dk  10 mmol / l Dop = Dk =

Conținutul de glucoză în urină zilnică este determinat cu mmol / zi prin înmulțirea rezultatului obținut prin volumul de urină colectat pe zi.

Notă. Când conținutul de zahăr din urină trebuie să fie diluat mai mult de 1%.

În prezent, laboratoarele biochimice utilizează o metodă expresă unică pentru analiza urinei pentru glucoză folosind testul de glucoză reactiv la testul de glucoză sau folosind benzi de testare combinate pentru pH, proteine, glucoză, corpuri cetone și sânge. Benzi de testare, scufundat într-un vas cu urină timp de o secundă. și comparați culoarea de pe scară.

Determinarea proteinei utilizând indicator roșu de pirogalol

Principiul metodei se bazează pe măsurarea fotometrică a densității optice a soluției dintr-un complex colorat format prin interacțiunea moleculelor de proteine ​​cu molecule ale complexului de colorare roșie a pirogololului și molibdat de sodiu (complex Pyrogallol roșu-molibdat) într-un mediu acid. Intensitatea culorii soluției este proporțională cu conținutul de proteine ​​din materialul studiat. Prezența detergenților în reactiv oferă o definiție echivalentă a proteinelor de natură și structură diferite.

Reactivi. 1) soluție de pirogalol roșu (PGA) de 1,5 mmol / l: 60 mg de PGA sunt dizolvate în 100 ml de metanol. Depozitați la o temperatură de 0-5 ° С; 2) soluție tampon succinat 50 mmol / l pH 2,5: 5,9 g acid succinic (HOOC-CH2-CH2-COOH); Se dizolvă în 900 ml apă distilată 0,14 g oxalat de sodiu (Na2C2O4) și 0,5 g benzoat de sodiu (C6H5COONa); 3) soluție de hidrat de cristal de molibdat de sodiu 10 mmol / l (Na2MoO4 × 2H2O): 240 mg de molibdat de sodiu se dizolvă în 100 ml de apă distilată; 4) Reactiv de lucru: la 900 ml soluție tampon succinat se adaugă 40 ml soluție de PHC și 4 ml soluție de molibdat de sodiu. PH-ul soluției este ajustat la 2,5 cu o soluție de acid clorhidric 0,1 mol / l (HCl) și volumul său este ajustat la 1 l. Reactivul în această formă este gata de utilizare și este stabil când este depozitat într-un loc întunecat și la o temperatură de 2-25 ° C timp de 6 luni; 5) 0,5 g / l soluție standard de albumină.

Cursul de determinare. 0,05 ml din urina studiată este introdusă în primul tub de testare, 0,05 ml soluție standard albuminică se adaugă la cel de-al doilea tub de testare și 0,05 ml apă distilată la cel de-al treilea eprubetă (proba de control), apoi se adaugă 3 ml de reactiv de lucru la aceste eprubete. Conținutul tuburilor este amestecat și, după 10 minute, eșantionul și standardul sunt fotometrate pe o probă de control la o lungime de undă de 596 nm într-o cuvă cu o lungime de cale optică de 10 mm.

Calculul concentrației de proteine ​​din proba de urină analizată se efectuează conform formulei:

C = 0,5 × Apr / Ast,

unde C este concentrația de proteină din proba de urină analizată, g / l; Apr și Ast - stingerea probei de urină investigată și a soluției standard de albumină, g / l; 0,5 - concentrația soluției standard de albumină, g / l.

• culoarea soluției (complexul color) este stabilă timp de o oră;
• raportul direct proporțional între concentrația de proteine ​​din probă și absorbția soluției depinde de tipul fotometrului;
• când conținutul de proteine ​​din urină este mai mare de 3 g / l, proba este diluată cu soluție izotonică de clorură de sodiu (9 g / l) și se determină repetarea. Gradul de diluare este luat în considerare la determinarea concentrației de proteine.

• Determinarea proteinei urinare
• Procesul acidului sulfosalicilic unificat
• Metoda Unified Brandberg - Roberts - Stolnikov
• Determinarea cantității de proteine ​​din urină prin reacția cu acidul sulfosalicilic
• Metoda Biuret
• Detectarea în urină a proteinei Bens - Jones

Proteinuria este un fenomen în care proteina este detectată în urină, ceea ce indică posibilitatea unei leziuni la rinichi, servește ca factor de dezvoltare a bolilor de inimă, a vaselor de sânge, a vaselor limfatice.

Detectarea proteinelor în urină nu indică întotdeauna o boală. Un fenomen similar este tipic chiar și pentru persoanele absolut sănătoase, ale căror proteine ​​de urină pot fi detectate. Hipotermia, efortul fizic, consumul de alimente proteice conduc la apariția proteinelor în urină, care dispare fără tratament.

La momentul screening-ului, 17% dintre persoanele sănătoase determină proteine, dar numai 2% din acest număr de persoane prezintă un rezultat pozitiv al testului ca semn al bolii renale.

Moleculele de proteine ​​nu trebuie să intre în sânge. Ele sunt vitale pentru organism - ele sunt un material de construcție pentru celule, participă la reacții ca coenzime, hormoni, anticorpi. La bărbați și femei, rata este absența completă a proteinei în urină.

Funcția de prevenire a pierderii de molecule de proteine ​​de către organism este efectuată de rinichi.

Două sisteme de rinichi sunt implicate în filtrarea urinei:

1. glomeruli - nu lasa in molecule mari, dar nu detine albumina, globulele - o fractiune mica de molecule de proteine;
2. tubule renale - proteine ​​adsorbante, filtrate glomerular, întoarcere înapoi la sistemul circulator.

Albuminul (aproximativ 49%), mucoproteinele, globulinele se găsesc în urină, din care ponderea imunoglobulinelor reprezintă aproximativ 20%.

Globuline - proteine ​​din zer cu greutate moleculară ridicată, produse în sistemul imunitar și ficat. Cele mai multe dintre ele sunt sintetizate de sistemul imunitar, se referă la imunoglobuline sau anticorpi.

Albuminele sunt o fracțiune de proteine ​​care apar pentru prima dată în urină, chiar și cu leziuni renale minore. Există o anumită cantitate de albumină în urină sănătoasă, dar este atât de nesemnificativ încât nu poate fi detectată utilizând diagnosticarea de laborator.

Pragul inferior care poate fi detectat utilizând diagnosticul de laborator este 0,033 g / l. Dacă se pierde mai mult de 150 mg de proteine ​​pe zi, se vorbește despre proteinurie.

Elemente de bază ale proteinei din urină

Boala cu proteinurie ușoară este asimptomatică. Din punct de vedere vizual, urina fără proteine ​​nu poate fi distinsă de urină, în care există o cantitate mică de proteine. Unea urină spumoasă devine deja cu un grad ridicat de proteinurie.

Este posibil să se presupună o excreție activă a proteinei în urină prin apariția pacientului numai cu un grad moderat sau sever al bolii datorită apariției edemelor membrelor, feței și abdomenului.

În stadiile incipiente ale bolii, următoarele pot fi semne indirecte ale proteinuriei:

• determinarea decolorării urinei;
• slăbirea crescândă;
• lipsa apetitului;
• greață, vărsături;
• durere osoasă;
• somnolență, amețeli;
• temperatură ridicată.

Aspectul acestor semne nu poate fi ignorat, în special în timpul sarcinii. Aceasta poate însemna o ușoară abatere de la normă și poate fi un simptom al dezvoltării preeclampsiei, preeclampsiei.

Cuantificarea pierderii de proteine ​​nu este o sarcină ușoară, pentru a obține o imagine mai completă a stării pacientului, se folosesc mai multe teste de laborator.

Dificultățile în alegerea metodei de detectare a excesului de proteine ​​în urină sunt explicate prin:

• concentrație scăzută de proteine, pentru care recunoașterea necesită instrumente de înaltă precizie;
• compoziția urinei, complicând sarcina, deoarece conține substanțe care distorsionează rezultatul.

Cele mai mari informații sunt furnizate prin analiza primei porțiuni de dimineață a urinei, care se colectează după trezire.

În ajunul analizei, trebuie îndeplinite următoarele condiții:

• Nu mâncați alimente picante, prajite, proteice, alcool;
• excludeți diuretic timp de 48 de ore;
• limita activitatea fizică;
• urmați cu atenție regulile de igienă personală.

Urina de dimineață este cea mai informativă, deoarece este pe termen lung în vezică, mai puțin dependentă de aportul alimentar.

Cantitatea de proteine ​​din urină poate fi analizată prin porțiune aleatorie, care este luată în orice moment, dar această analiză este mai puțin informativă, cu atât este mai mare probabilitatea de eroare.

Pentru a cuantifica pierderea zilnică de proteine, se efectuează o analiză a urinei zilnice totale. Pentru a face acest lucru, în 24 de ore colectați într-un recipient special din plastic toate urina alocată pentru această zi. Puteți începe să colectați în orice moment. Condiția principală - exact ziua colecției.

Definiția calitativă a proteinuriei se bazează pe denaturarea proteinei prin factori fizici sau chimici. Metodele calitative se referă la screening-ul, care permite stabilirea prezenței proteinelor în urină, dar care nu oferă posibilitatea evaluării exacte a gradului de proteinurie.

Probele folosite:

• cu fierbere;
• acid sulfosalicilic;
• acid azotic, reactiv Larionic la proba inelului Heller.

O probă cu acid sulfosalicilic este efectuată prin compararea unei probe de urină de control cu ​​una experimentată, în care se adaugă 7-8 picături de acid sulfosalicilic 20% în urină. Concluzia privind prezența proteinei se face în funcție de intensitatea turbidității opalescente care apare în eprubeta în timpul reacției.

Testul Geller folosit mai frecvent cu ajutorul acidului azotic 50%. Sensibilitatea metodei este de 0,033 g / l. Cu o astfel de concentrație de proteină într-un tub de testare cu un eșantion de urină și un reactiv timp de 2-3 minute după începerea experimentului, apare un inel de fir alb, a cărui formare indică prezența proteinei.

Metodele semi-cantitative includ:

• metoda de determinare a proteinelor în benzi de testare a urinei;
• Metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov.

Metoda de determinare conform metodei Brandberg-Roberts-Stolnikov se bazează pe metoda inelului Geller, dar permite estimarea mai exactă a cantității de proteine. Când efectuați un test folosind această tehnică, mai multe diluții de urină ating aspectul unui inel de proteine ​​asemănător firului în intervalul de timp cuprins între 2-3 minute de la începutul testului.

În practică, metoda cu bandă de testare este utilizată cu colorantul de culoare albastră de bromfenol ca indicator. Dezavantajul benzilor de testare este sensibilitatea selectivă la albumină, ceea ce duce la o distorsionare a rezultatului în cazul creșterii concentrației de urină a globulinelor sau a altor proteine.

Dezavantajele metodei sunt, de asemenea, sensibilitatea relativ scăzută a testului la proteină. Benzile de testare încep să reacționeze la prezența proteinei în urină la o concentrație a proteinei mai mare de 0,15 g / l.

Metodele cantitative de evaluare pot fi divizate în mod condiționat în:

Metodele se bazează pe proprietatea proteinelor pentru a reduce solubilitatea sub acțiunea unui agent de legare cu formarea unui compus slab solubil.

Agenții care cauzează legarea proteinelor pot fi:

• acid sulfosalicilic;
• acid tricloracetic;
• clorură de benzetoniu.

Pe rezultatele testelor, concluziile sunt extrase pe baza gradului de atenuare a fluxului luminos din eșantion cu suspensie în comparație cu cel de control. Rezultatele acestei metode nu pot fi întotdeauna atribuite fiabile din cauza diferențelor în condițiile: vitezei de amestecare a reactanților, temperaturii, acidității mediului.

Efectul asupra evaluării aportului de medicamente cu o zi înainte, înainte de efectuarea testelor folosind aceste metode, nu poate fi luat

• antibiotice;
• sulfonamide;
• medicamente care conțin iod.

Metoda se referă la disponibil la cost, ceea ce îi permite să fie utilizat pe scară largă pentru screening. Dar rezultate mai precise pot fi obținute folosind tehnici colorimetrice mai scumpe.

Metodele sensibile care determină cu precizie concentrația de proteine ​​în urină includ metodele colorimetrice.

Puteți face acest lucru cu mare precizie:

• reacția biuret;
• tehnica Lowry;
• Tehnici de colorare care folosesc coloranți care formează complexe cu proteine ​​urinare care diferă vizibil de eșantion.

Metode colorimetrice pentru detectarea proteinelor în urină

Metoda se referă la o metodă fiabilă, foarte sensibilă, care permite determinarea în albumină a urinei, globuline, paraproteine. Este folosit ca principala metodă pentru clarificarea rezultatelor controversate ale testelor, precum și a proteinei urinare zilnice la pacienții cu departamente nefrologice ale spitalelor.

Chiar și rezultate mai precise pot fi obținute prin metoda Lowry, care se bazează pe reacția biuret, precum și reacția Folin, care recunoaște triptofanul și tirozina în moleculele de proteine.

Pentru a elimina erorile posibile, proba de urină este purificată prin dializă din aminoacizi, acid uric. Erori sunt posibile atunci când se utilizează salicilați, tetracicline, clorpromazină.

Metoda cea mai exactă pentru determinarea unei proteine ​​se bazează pe proprietatea sa de a se lega la coloranții care sunt utilizați:

• Ponceau;
• Coomassie albastru strălucitor;
• piroglic roșu.

În timpul zilei, cantitatea de proteine ​​excretată în urină variază. Pentru a evalua mai obiectiv pierderea de proteine ​​în urină, introduceți conceptul de proteine ​​zilnice în urină. Această valoare este măsurată în g / zi.

Pentru o evaluare rapidă a proteinei zilnice în urină, cantitatea de proteină și creatinină este determinată într-o singură porție de urină, apoi raportul proteină / creatinină este extras din pierderea de proteină pe zi cu raportul.

Metoda se bazează pe faptul că rata de excreție a creatininei urinare este constantă, nu se schimbă în timpul zilei. La o persoană sănătoasă, raportul normal de proteine: creatinină în urină este de 0,2.

Această metodă elimină posibilele erori care pot apărea la colectarea urinei zilnice.

Testele calitative mai des decât testele cantitative dau rezultate fals pozitive sau false negative. Erori apar în legătură cu medicația, obiceiurile alimentare, activitatea fizică în ajunul analizei.

Decodificarea acestui test calitativ este dată de evaluarea vizuală a turbidității în eprubeta în comparație cu rezultatul testului cu controlul:

1. reacția slabă pozitivă este estimată ca +;
2. pozitiv ++;
3. puternic pozitiv +++.

Testul cu inel Geller evaluează mai precis prezența proteinei în urină, dar nu permite cuantificarea proteinei în urină. Ca și în cazul testului acidului sulfosalicilic, testul Geller nu oferă decât o idee aproximativă despre conținutul de proteine ​​din urină.

Metoda permite evaluarea gradului de proteinurie cantitativ, dar prea consumatoare de timp, inexactă, deoarece cu o diluție puternică scade acuratețea evaluării.

Pentru a calcula proteina, trebuie să multiplicați gradul de diluție a urinei cu 0, 033 g / l:

Testul nu necesită condiții speciale, această procedură este ușor de făcut acasă. Pentru a face acest lucru, trebuie să coborâți banda de test în urină timp de 2 minute.

Rezultatele vor fi exprimate prin numărul de plusuri de pe bandă, a căror decodificare este cuprinsă în tabel:

1. Rezultatele testelor care corespund valorilor de până la 30 mg / 100 ml corespund proteinuriei fiziologice.
2. Valorile pe benzi de test 1+ și 2 ++ semnifică proteinurie semnificativă.
3. Valorile 3 +++, 4 ++++ sunt marcate cu proteinurie patologică cauzată de afecțiunile renale.

Benzile de testare pot determina numai aproximativ creșterea proteinei în urină. Ele nu sunt folosite pentru diagnosticarea corectă și cu atât mai mult cu cât nu pot spune ce înseamnă.

Nu permiteți benzilor de testare să evalueze în mod adecvat cantitatea de proteine ​​din urină la femeile gravide. O metodă mai fiabilă de evaluare este determinarea proteinei în urină zilnică.

Determinarea proteinei urinare utilizând benzi de testare:

Proteina zilnică în urină este un diagnostic mai precis al evaluării stării funcționale a rinichilor. Pentru aceasta, trebuie să colectați toată cantitatea de urină excretată de rinichi pe zi.

Conținutul de proteine ​​din urină poate fi găsit prin raportul dintre proteine: creatinină, datele fiind prezentate în tabel:

Valorile valide pentru raportul proteină / creatinină sunt datele din tabel:

Cu pierderea a peste 3,5 g de proteine ​​pe zi, această afecțiune se numește proteinurie masivă.

Dacă există o cantitate mare de proteine ​​în urină, este necesară o nouă examinare după o lună, apoi după 3 luni, în funcție de rezultate, care stabilește de ce este depășită norma.

Cauzele creșterii proteinei în urină sunt producția crescută în organism și încălcarea rinichilor, distingând proteinuria:

• diferențele fiziologice - minore față de normă sunt cauzate de procese fiziologice, rezolvate spontan;
• modificările patologice - sunt cauzate ca urmare a procesului patologic în rinichi sau în alte organe ale corpului, fără a progresa tratamentul.

O ușoară creștere a proteinei poate fi observată cu nutriție bogată în proteine, arsuri mecanice, leziuni, însoțite de creșterea producției de imunoglobuline.

O proteinurie ușoară poate fi cauzată de efort fizic, de stres psiho-emoțional sau de administrarea anumitor medicamente.

Proteinuria fiziologică este o creștere a proteinei urinare la copii în primele zile după naștere. Dar, după o săptămână de viață, conținutul de proteine ​​din urină a unui copil este considerat o abatere de la normă și indică o evoluție a patologiei.

Boala renală, bolile infecțioase sunt, de asemenea, uneori însoțite de apariția proteinelor în urină.

Astfel de stări corespund, de obicei, cu un grad redus de proteinurie, sunt fenomene tranzitorii, trec rapid pe cont propriu, fără a necesita un tratament special.

Se observă condiții mai severe, proteinurie severă în cazul:

• glomerulonefrita;
• diabet;
• boli de inima;
• cancer de vezică urinară;
• mielom multiplu;
• infecție, leziuni medicamentoase, boală de rinichi policistă;
• hipertensiune arterială;
• lupus eritematos sistemic;
• Sindromul Goodpasture.

Obstrucția intestinală, insuficiența cardiacă și hipertiroidismul pot determina urmele de proteine.

Varietățile de proteinurie sunt clasificate în mai multe moduri. Pentru o evaluare calitativă a proteinelor se poate folosi clasificarea Yaroshevsky.

În conformitate cu sistematica lui Yaroshevsky, creată în 1971, se distinge proteinuria:

1. renal - care include încălcarea filtrării glomerulare, eliberarea proteinelor tubulare, lipsa reabsorbției proteinelor din tubule;
2. prerenal - apare în afara rinichilor, excreția hemoglobinei, proteine ​​care apar în exces în sânge ca urmare a mielomului multiplu;
3. Postrenal - apare la locul tractului urinar după rinichi, excreția de proteine ​​în distrugerea organelor urinare.

Pentru o evaluare cantitativă a ceea ce se întâmplă, gradul condiționat de proteinurie este izolat. Trebuie reamintit faptul că acestea pot trece cu ușurință într-unul mai greu fără tratament.

Cel mai sever stadiu al proteinuriei se dezvoltă odată cu pierderea a mai mult de 3 g de proteine ​​pe zi. Pierderea de proteine ​​de la 30 mg la 300 mg pe zi corespunde stadiului moderat sau microalbumurie. Până la 30 mg de proteine ​​în urină zilnică înseamnă o proteinurie ușoară.

Proteina normă în urină cât de mult?

Proteina normală în urină este practic absentă (mai puțin de 0,002 g / l). Cu toate acestea, în anumite condiții, o cantitate mică de proteine ​​poate apărea în urină la persoanele sănătoase după ingerarea unei cantități mari de alimente din proteină, ca rezultat al răcirii, cu stres emoțional, efort fizic prelungit (așa numita proteinurie marcantă).

Apariția unei cantități semnificative de proteine ​​în urină (proteinurie) este o patologie. Cauza proteinuriei poate fi boala renală (glomerulonefrita acută și cronică, pielonefrita, nefropatia gravidă etc.) sau tractul urinar (inflamația vezicii urinare, prostatei, ureterelor). Proteinuria renală poate fi organică (glomerulară, tubulară și excesivă) și funcțională (proteinurie febrilă, ortostatică la adolescenți, la suprasolicitarea sugarilor, la nou-născuți). Proteinuria funcțională nu este asociată cu patologia renală. Cantitatea zilnică de proteine ​​variază la pacienți de la 0,1 până la 3,0 g sau mai mult. Compoziția proteinelor urinare este determinată prin electroforeză. Apariția în urină a proteinei Bens-Jones este caracteristică a mielomului și a macroglobulinemiei Waldenstrom, 2 microglobuline în cazul deteriorării tubulilor renale.

Proteina normală în urină este practic absentă (mai puțin de 0,002 g / l).

Semnele principale ale bolii au fost detectate în studiul urinei.

SG Greutate specifică. O scădere a greutății specifice indică o scădere a capacității rinichilor de a concentra urina și de a elimina toxinele din organism, ca în cazul insuficienței renale. Creșterea greutății specifice este asociată cu o cantitate mare de zahăr în urină, săruri. Trebuie remarcat faptul că este imposibil să se evalueze gravitatea specifică pentru un singur test de urină, pot exista modificări aleatorii, este necesar să se efectueze o analiză de urină de 1-2 ori.

Proteină Proteină în urină - proteinurie. Cauza proteinuriei poate fi afectarea rinichilor în sine în nefrită, amiloidoză și leziuni prin otrăvire. Proteinele din urină pot apărea, de asemenea, din cauza bolilor de tract urinar (pielonefrite, cistite, prostatite).

Glucoză Glicoză (zahăr) în urină - glicozurie - cel mai adesea datorată diabetului. O cauză mai rară este înfrângerea tubulilor renale. Este foarte deranjant dacă organele cetone sunt detectate împreună cu zahărul în urină. Acest lucru se întâmplă cu diabet zaharat sever, nealiniat și este un avertizor al celor mai severe complicații ale diabetului zaharat - comă diabetică.

Bilirubin, urobilinogen Bilirubin și urobilin sunt determinate în urină sub diferite forme de icter.

Eritrocite Eritrocite în urină - hematurie. Acest lucru se întâmplă fie cu înfrângerea rinichilor înșiși, cel mai adesea cu inflamația lor, fie cu pacienții cu boli ale tractului urinar. Dacă, de exemplu, o piatră se deplasează de-a lungul lor, poate afecta membrana mucoasă, în urină vor fi celule roșii sanguine. O tumoare de rinichi decăzută poate duce, de asemenea, la hematurie.

Leucocite Leucocitele din urină - leucocitare, cel mai adesea rezultatul modificărilor inflamatorii ale tractului urinar la pacienții cu pielonefrită, cistită. Leucocitele sunt adesea determinate de inflamația organelor genitale externe feminine, la bărbați, prin inflamarea glandei prostatei.

Cilindri Cilindrii sunt structuri microscopice specifice. Cilindrii hialini în cantitate de 1-2 pot fi la o persoană sănătoasă. Acestea se formează în tubulii renale, se lipesc împreună particule de proteine. Dar cresterea numarului lor, cilindrii de alte tipuri (granule, eritrocite, grasimi) indica intotdeauna daunele tesutului renal in sine. Există cilindri în bolile inflamatorii ale rinichilor, leziuni metabolice, cum ar fi diabetul.

Metoda informativă și limitele sale. Conținutul informațiilor din testul general de urină pentru recunoașterea bolilor specifice rinichilor este scăzut, de obicei necesită studii suplimentare și mai precise. Dar cercetarea este foarte importantă, mai ales când se efectuează studii preventive, deoarece permite identificarea semnelor precoce ale bolii renale. Este, de asemenea, cunoscut faptul că deseori boala rinichi apare ascunsă și numai un studiu al urinei le permite să suspecteze și să efectueze o examinare suplimentară necesară.

În majoritatea laboratoarelor, când se examinează urina pentru proteine, se utilizează mai întâi reacții calitative care nu detectează proteine ​​în urina unei persoane sănătoase. Dacă proteina din urină este detectată prin reacții calitative, se efectuează determinări cantitative (sau semicantitative). În același timp, caracteristicile metodelor utilizate care acoperă un spectru diferit de uroproteine ​​sunt importante. Astfel, atunci când se determină proteina utilizând acid sulfosalicilic 3%, cantitatea de proteină este considerată normală până la 0,03 g / l, în timp ce se utilizează metoda pirogalolului, limita valorilor proteinei normale crește la 0,1 g / l. În acest sens, în forma de analiză este necesar să se indice valoarea normală a proteinei pentru metoda utilizată de laborator.

La determinarea cantităților minime de proteine, se recomandă repetarea analizei; în caz de îndoială, trebuie determinată pierderea zilnică de proteine ​​în urină. Urina normală zilnică conține proteine ​​în cantități mici. În condiții fiziologice, proteina filtrată este aproape complet reabsorbită de epiteliul tubulilor proximali, iar conținutul său în cantitatea zilnică de urină variază în funcție de autorii diferiți de la urmele până la 20 50, 80 100 mg și chiar până la 150 200 mg. Unii autori consideră că excreția zilnică a proteinelor în cantitatea de 30 50 mg / zi este norma fiziologică pentru un adult. Alții consideră că excreția proteică urinară nu trebuie să depășească 60 mg / m2 suprafață corporală pe zi, excluzând prima lună de viață, când valoarea proteinuriei fiziologice poate fi de patru ori mai mare decât valorile specificate.

Condiția generală pentru apariția proteinelor în urină a unei persoane sănătoase este concentrația lor destul de ridicată în sânge și greutatea moleculară nu mai mare de 100200 kDa.

aceasta nu este norma, cu diagnosticul dvs. este posibil, un alt lucru este faptul că pentru sindromul nefrotic este de fapt un indicator mic.. uitați-vă la clinică - umflarea, presiunea, etc, continuați să luați tratamentul prescris..

și totuși voi spune: este normal să nu fie!